mRNA vakcíny boli testované ešte za Ficových vlád !!

Zverejnené: 12. januára 2018 mRNA vakcíny – nová éra vo vakcinológii

Myslím si, že vôbec nie je potrebné komentovať. Následne odosielam tieto veci pre SAV, ŠÚKL, ministerstvu zdravotníctva SR, predsedovi vlády SR, prezidentovi SR, Dankovi, poslancom NR SR, Europoslancom SR, mimoparlamentným stranám, aby sa pozreli na seba do zrkadla a prestali klamať, že o ničom nevedeli !! Podviedli ľudí a všetci !! Keďže EMA sama priznáva o týchto klinických štúdiách, a každý jeden štátny úrad o tom vedel ako je SAV, ŠÚKL, imunológia, infektológia , politici, výbory NR SR, Europoslanci a atď atď. To, čo dnes vyvádzajú Fico s Kotlárom, je len fraška, divadlo . Sú to klamári, ako pri MZP a Pandemickej zmluve !! Copyright© O.z. Dôstojnosť Slovenska

Odporúčam každému to aj čítať, pretože následne boli prijaté niektoré zákony pre uvedenie týchto vakcín a hromadné klinické štúdie počas nedávneho očkovania, nežiadúce účinky a atď, vojenská organizácia BARDA a podobne !! Vedeli o všetkom, preto nebojovali za ľudí, ale podlo vo všetkom klamali, hlasovali ZA a vo všetkých zákonoch a to doslovne všetci !!

Pritom v roku 2017 bolo zriadené: Panely odborníkov na zdravotnícke pomôcky, kde tieto panely následne a urýchlene schválili mRNA vakcíny.

V Európskej únii (EÚ) poskytujú odborné panely zdravotníckych pomôcok vstupné informácie o klinickom hodnotení a hodnotení výkonu určitých vysokorizikových zdravotníckych pomôcok a diagnostických zdravotníckych pomôcok in vitro na účely posudzovania zhody. Pomáha to zaistiť bezpečnosť a výkonnosť zdravotníckych pomôcok na trhu EÚ a uľahčuje ich včasnú dostupnosť pre pacientov.

Panely odborníkov boli zriadené podľa týchto nariadení:

• Zdravotnícke pomôcky (nariadenie (EÚ) 2017/745) 
• Diagnostické zariadenia in vitro (nariadenie (EÚ) 2017/746)

Zloženie

Európska komisia vymenúva členov panelov odborníkov po konzultácii s  Koordinačnou skupinou pre zdravotnícke pomôcky (MDCG) na základe ich vedeckých, klinických a technických odborných znalostí.

Vedie zoznam oprávnených odborníkov, ktorí nie sú vymenovaní do poroty. V prípade potreby možno týchto odborníkov požiadať, aby podporili prácu skupiny odborníkov.

Životopisy odborníkov a vyhlásenia o záujme (DoI)  sú k dispozícii na webovej stránke Európskej komisie .

Viac informácií o tom, ako sa pripojiť k panelu odborníkov, nájdete nižšie.

Odborné panely

Existuje dvanásť odborných panelov.

Skríningová komisia určí, či je potrebný názor odbornej komisie.

Existuje jedenásť tematických panelov:

• Ortopédia, traumatológia, rehabilitácia, reumatológia
• Obehový systém
• Neurológia
• Dýchací systém, anestéziológia, intenzívna medicína
• Endokrinológia a diabetes
• Všeobecná a plastická chirurgia a stomatológia
• Pôrodníctvo a gynekológia vrátane reprodukčnej medicíny
• Gastroenterológia a hepatológia
• Nefrológia a urológia
• Oftalmológia
• Diagnostické zdravotnícke pomôcky in vitro

Koordinačný výbor zložený z predsedov a podpredsedov odborných panelov umožňuje výmenu informácií a zachováva spoločné štandardy a postupy.

Súvisiace právne predpisy EÚ

Nariadenie (EÚ) 2017/746, Nariadenie (EÚ) 2017/745

Pracovné pokyny pre notifikované osoby o uplatňovaní článku 54 nariadenia (EÚ) 2017/745 o zdravotníckych pomôckach a článku 48 nariadenia (EÚ) 2017/746 o diagnostických zdravotníckych pomôckach in vitro Referenčné číslo: EMA/416077/2023

Angličtina (EN) (2,29 MB – PDF) Zobraziť Zdroj

Všetko o schválených vakcínach, klinické skúšky, mRNA, saRNA tu a tu

Teraz prejdime k tým klinickým štúdiám mRNA, saRNA, …….

Kľúčové body

• Nedávne zlepšenia mRNA vakcín pôsobia tak, že zvyšujú transláciu proteínov, modulujú vrodenú a adaptívnu imunogenicitu a zlepšujú dodávanie.
• mRNA vakcíny vyvolali silnú imunitu proti cieľom infekčných chorôb na zvieracích modeloch vírusu chrípky, vírusu Zika, vírusu besnoty a ďalších, najmä v posledných rokoch, s použitím lipidov zapuzdrených alebo nahých foriem sekvenčne optimalizovanej mRNA.
• Rôzne prístupy k vakcínam proti rakovine mRNA, vrátane vakcín s dendritickými bunkami a rôznych typov priamo injikovateľnej mRNA, sa použili v mnohých klinických štúdiách rakoviny, pričom niektoré sľubné výsledky ukázali antigén-špecifické reakcie T buniek a predĺžené prežitie bez ochorenia v niektorých prípadoch. Copyright© O.z. Dôstojnosť Slovenska
• Medzi terapeutické aspekty a výzvy patrí rozšírenie výroby v súlade s pravidlami správnej výrobnej praxe (GMP), stanovenie predpisov, ďalšie dokumentovanie bezpečnosti a zvyšovanie účinnosti.
• Dôležitými budúcimi smermi výskumu bude porovnanie a objasnenie imunitných dráh aktivovaných rôznymi platformami vakcín mRNA, zlepšenie súčasných prístupov založených na týchto mechanizmoch a začatie nových klinických skúšok proti ďalším cieľom chorôb.

Abstraktné

mRNA vakcíny predstavujú sľubnú alternatívu ku konvenčným vakcínovým prístupom kvôli ich vysokej účinnosti, schopnosti rýchleho vývoja a potenciálu pre nízkonákladovú výrobu a bezpečné podávanie. Avšak ich aplikácia bola donedávna obmedzená nestabilitou a neefektívnym in vivo dodaním mRNA. Nedávne technologické pokroky teraz do značnej miery prekonali tieto problémy a viaceré platformy vakcín mRNA proti infekčným chorobám a niekoľkým typom rakoviny preukázali povzbudivé výsledky na zvieracích modeloch aj na ľuďoch. Tento prehľad poskytuje podrobný prehľad mRNA vakcín a zvažuje budúce smerovanie a výzvy pri rozširovaní tejto sľubnej vakcínovej platformy na široké terapeutické využitie.

Hlavné

Vakcíny zabránia mnohým miliónom chorôb a zachránia každý rok množstvo životov ¹ . V dôsledku rozsiahleho používania vakcín bol vírus pravých kiahní úplne vyhubený a výskyt detskej obrny, osýpok a iných detských chorôb sa na celom svete drasticky znížil ² . Konvenčné vakcínové prístupy, ako sú živé oslabené a inaktivované patogény a podjednotkové vakcíny, poskytujú trvalú ochranu proti rôznym nebezpečným chorobám ³ . Napriek tomuto úspechu stále existujú veľké prekážky vo vývoji vakcín proti rôznym infekčným patogénom, najmä tým, ktoré sú schopné lepšie sa vyhnúť adaptívnej imunitnej odpovedi ⁴ . Okrem toho pre väčšinu nových vírusových vakcín nie je hlavnou prekážkou účinnosť konvenčných prístupov, ale potreba rýchlejšieho vývoja a rozsiahleho nasadenia. Nakoniec, konvenčné vakcínové prístupy nemusia byť aplikovateľné na neinfekčné ochorenia, ako je rakovina. Preto je naliehavo potrebný vývoj silnejších a všestrannejších očkovacích platforiem. Copyright© O.z. Dôstojnosť Slovenska

Nukleokyselinové terapeutiká sa ukázali ako sľubné alternatívy ku konvenčným vakcínovým prístupom. Prvá správa o úspešnom použití in vitro transkribovanej (IVT) mRNA u zvierat bola publikovaná v roku 1990, keď boli myšiam injikované mRNA reportérového génu a bola zistená produkcia proteínov ⁵ . Následná štúdia v roku 1992 preukázala, že podanie mRNA kódujúcej vazopresín do hypotalamu môže vyvolať fyziologickú odpoveď u potkanov ⁶ . Tieto skoré sľubné výsledky však neviedli k podstatným investíciám do vývoja mRNA terapeutík, najmä kvôli obavám spojeným s nestabilitou mRNA, vysokou vrodenou imunogenicitou a neefektívnym in vivo dodaním. Namiesto toho sa v tejto oblasti uplatňovali terapeutické prístupy založené na DNA a proteínoch ^7 , 8 .

Za posledné desaťročie veľké technologické inovácie a investície do výskumu umožnili, aby sa mRNA stala sľubným terapeutickým nástrojom v oblasti vývoja vakcín a proteínovej substitučnej terapie. Použitie mRNA má niekoľko výhodných vlastností oproti podjednotkovým, usmrteným a živým oslabeným vírusom, ako aj vakcínam na báze DNA. Po prvé, bezpečnosť: keďže mRNA je neinfekčná, neintegrujúca sa platforma, neexistuje žiadne potenciálne riziko infekcie alebo inzerčnej mutagenézy. ^{Okrem toho je} mRNA degradovaná normálnymi bunkovými procesmi a jej polčas ^rozpadu in vivo možno regulovať použitím rôznych modifikácií a ^{spôsobov podávania9,10,11,12 . Inherentná} imunogenicita mRNA môže byť znížená, aby sa ďalej ^{zvýšil bezpečnostný profil9,12,13 .} Po druhé, účinnosť: rôzne modifikácie robia mRNA stabilnejšou a vysoko translatovateľnou ^{9 , 12 , 13} . Efektívne dodanie in vivo možno dosiahnuť formulovaním mRNA do molekúl nosiča, čo umožňuje rýchle vychytávanie a expresiu v cytoplazme (prehľad v odkazoch 10 , 11 ). mRNA je minimálny genetický vektor; preto sa predchádza antivektorovej imunite a mRNA vakcíny sa môžu podávať opakovane. Po tretie, výroba: mRNA vakcíny majú potenciál na rýchlu, nenákladnú a škálovateľnú výrobu, najmä vďaka vysokým výťažkom transkripčných reakcií in vitro .

Oblasť mRNA vakcín sa vyvíja extrémne rýchlo; za posledných niekoľko rokov sa nazhromaždilo veľké množstvo predklinických údajov a začali sa viaceré klinické štúdie na ľuďoch. V tomto prehľade diskutujeme o súčasných prístupoch k vakcínam mRNA, sumarizujeme najnovšie zistenia, upozorňujeme na výzvy a nedávne úspechy a ponúkame pohľady na budúcnosť vakcín mRNA. Údaje naznačujú, že mRNA vakcíny majú potenciál vyriešiť mnohé výzvy vo vývoji vakcín proti infekčným chorobám aj rakovine.

Základná farmakológia mRNA vakcín

mRNA je medzistupňom medzi transláciou DNA kódujúcej proteín a produkciou proteínov ribozómami v cytoplazme. Ako vakcíny sa v súčasnosti študujú dva hlavné typy RNA: nereplikujúca sa mRNA a vírusovo odvodená, samoamplifikujúca sa RNA. Bežné vakcíny na báze mRNA kódujú požadovaný antigén a obsahujú 5′ a 3′ nepreložené oblasti (UTR), zatiaľ čo samoamplifikujúce sa RNA kódujú nielen antigén, ale aj vírusový replikačný mechanizmus, ktorý umožňuje intracelulárnu amplifikáciu RNA a hojnú expresiu proteínov. Copyright© O.z. Dôstojnosť Slovenska

Konštrukcia optimálne preloženej IVT mRNA vhodnej na terapeutické použitie bola ^{preskúmaná skôr14,15 .} V stručnosti, IVT mRNA je produkovaná z lineárneho DNA templátu pomocou T7, T3 alebo Sp6 fágovej RNA ^{polymerázy16} . Výsledný produkt by mal optimálne obsahovať otvorený čítací rámec, ktorý kóduje požadovaný proteín, lemujúce UTR, 5′ uzáver a poly(A) chvost. mRNA je teda skonštruovaná tak, aby sa podobala úplne spracovaným zrelým molekulám mRNA, ako sa prirodzene vyskytujú v cytoplazme eukaryotických buniek.

Komplexovanie mRNA na dodávanie in vivo bolo tiež ^nedávno podrobne ^{opísané10,11 .} Nahá mRNA je rýchlo degradovaná extracelulárnymi RNázami ¹⁷ a nie je účinne internalizovaná. Bolo teda vyvinuté veľké množstvo in vitro a in vivo transfekčných činidiel, ktoré uľahčujú bunkový príjem mRNA a chránia ju pred degradáciou. Akonáhle mRNA prejde do cytosolu, bunkový translačný aparát produkuje proteín, ktorý podlieha posttranslačným modifikáciám, čo vedie k správne poskladanému, plne funkčnému proteínu. Táto vlastnosť mRNA farmakológie je obzvlášť výhodná pre vakcíny a proteínové substitučné terapie, ktoré vyžadujú, aby boli cytosolické alebo transmembránové proteíny dodané do správnych bunkových kompartmentov pre správnu prezentáciu alebo funkciu. IVT mRNA je nakoniec degradovaná normálnymi fyziologickými procesmi, čím sa znižuje riziko toxicity metabolitov.

Nedávne pokroky v technológii vakcín mRNA

V posledných rokoch boli vyvinuté rôzne mRNA vakcínové platformy a overené v štúdiách imunogenicity a účinnosti18 ^{, 19 , 20 .} Vďaka inžinierstvu RNA sekvencie je syntetická mRNA preložiteľnejšia ako kedykoľvek predtým. Boli vyvinuté vysoko účinné a netoxické nosiče RNA, ktoré v niektorých prípadoch21,22 ^{umožňujú predĺženú} expresiu antigénu in vivo ( tabuľka 1 ⁾ . Niektoré formulácie vakcín obsahujú nové adjuvans, zatiaľ čo iné vyvolávajú silné reakcie v neprítomnosti známych adjuvans. Nasledujúca časť sumarizuje kľúčové pokroky v týchto oblastiach inžinierstva mRNA a ich vplyv na účinnosť vakcíny.

Tabuľka 1 Stratégie komplexovania mRNA vakcíny na použitie in vivo

Typ doručovacieho systému	Cesta doručenia	Druhy	Cieľ
Komerčné transfekčné činidlo	v	Myška	OVA 145
Protamín	id	Myš, fretka, prasa a človek	Vírus chrípky 18 , 52 , melanóm 150 , nemalobunkový karcinóm pľúc 200 , rakovina prostaty 36 , 52 , 151 , vírus besnoty 56 , OVA 36 , 52 , 155 a Lewisova rakovina pľúc 155
Protamínový lipozóm	iv	Myška	Rakovina pľúc 201
Polysacharidová častica	sc	Myš a králik	Vírus chrípky 98
Katiónová nanoemulzia	im	Myš, králik, fretka a makak rhesus	Vírus chrípky 96 , RSV50 , HIV-1 (odkazy 50 , 97 ), HCMV50 , Streptococcus spp . 100 , HCV a vírus besnoty 87
Katiónový polymér	sc a in	Myška	Vírus chrípky 99 a HIV-1 (odkazy 110 , 111 )
Lipozóm katiónového polyméru	iv	Myška	Melanóm 202 , 203 , rakovina pankreasu 204
Katiónové lipidové nanočastice	id, iv a sc	Myška	HIV-1 (odkaz 109 ) a OVA 152
Katiónový lipid, nanočastice cholesterolu	iv, sc a is	Myška	Vírus chrípky 59 , 108 , melanóm 59 , 141 , Moloneyho vírus myšej leukémie, OVA, HPV a pod. rakovina 59
Katiónový lipid, cholesterol, PEG nanočastice	id, im a sc	Myš, bavlník a makak rhesus	Vírus Zika 20 , 85 , 112 , vírus chrípky 22 , 94 , 95 , 205 , RSV 19 , HCMV, vírus besnoty 87 a melanóm 153
Nanočastice dendriméru	im	Myška	Vírus chrípky, vírus Ebola, Toxoplasma gondii 89 a vírus Zika 88

1. HCMV, ľudský cytomegalovírus; HCV, vírus hepatitídy C; HPV, ľudský papilomavírus; id, intradermálne; im, intramuskulárne; intranazálne; je intrasplenický; iv, intravenózne; OVA, modely rakoviny exprimujúce ovalbumín; PEG, polyetylénglykol; RSV, respiračný syncyciálny vírus; sc, subkutánne.

PowerPointová snímka

Optimalizácia translácie a stability mRNA

Táto téma bola obšírne diskutovaná v predchádzajúcich recenziách ^14 , 15 ; preto stručne zhrnieme kľúčové zistenia ( rámček 1 ). Elementy 5′ a 3′ UTR lemujúce kódujúcu sekvenciu výrazne ovplyvňujú stabilitu a transláciu mRNA, pričom obe sú kritickým problémom vakcín. Tieto ^regulačné sekvencie môžu byť odvodené z vírusových alebo eukaryotických génov a výrazne zvyšujú polčas a expresiu terapeutických ^{mRNA23,24 . Na efektívnu produkciu proteínu z mRNA25} je potrebná 5′ čiapočková štruktúra . Rôzne verzie 5′ uzáverov môžu byť pridané počas alebo po transkripčnej reakcii s použitím krycieho enzýmu ^{26 vírusu vakcínie alebo začlenením syntetického uzáveru alebo analógov 27 , 28} s antireverzným uzáverom . Poly(A) chvost tiež hrá dôležitú regulačnú úlohu pri translácii a stabilite ^mRNA25 ; teda optimálna dĺžka poly(A) ²⁴ musí byť pridaná k mRNA buď priamo z kódujúceho DNA templátu alebo pomocou poly(A) polymerázy. Použitie kodónov má navyše vplyv na transláciu proteínu. Nahradenie vzácnych kodónov často používanými synonymnými kodónmi, ktoré majú v cytosóle dostatok príbuznej tRNA, je bežnou praxou na zvýšenie produkcie proteínu z mRNA29 , ^hoci presnosť tohto modelu bola spochybňovaná30 ^. Obohatenie obsahu G:C predstavuje ďalšiu formu optimalizácie sekvencie, o ktorej sa ukázalo, že zvyšuje hladiny mRNA v ustálenom stave in vitro31 ^a expresiu proteínu in ^vivo12 .

Hoci expresia proteínu môže byť pozitívne modulovaná zmenou zloženia kodónov alebo zavedením modifikovaných nukleozidov (diskutované nižšie), je tiež možné, že tieto formy sekvenčného inžinierstva by mohli ovplyvniť sekundárnu štruktúru mRNA32 ^, kinetiku a presnosť translácie a simultánneho skladania proteínov33,34 ^{a expresiu kryptických} epitopov T buniek prítomných v čítacích ^rámcoch30 . Všetky tieto faktory by mohli potenciálne ovplyvniť veľkosť alebo špecifickosť imunitnej odpovede.

Rámček 1: Stratégie na optimalizáciu farmakológie mRNA

Na zlepšenie farmakologických aspektov mRNA sa v súčasnosti používa množstvo technológií. Rôzne použité modifikácie mRNA a ich vplyv sú zhrnuté nižšie.

• Syntetické cap analógy a capping enzýmy ^26 , 27 stabilizujú mRNA a zvyšujú proteínovú transláciu väzbou na eukaryotický translačný iniciačný faktor 4E (EIF4E)

• Regulačné prvky v 5′-netranslatovanej oblasti (UTR) a 3′-UTR ²³ stabilizujú mRNA a zvyšujú transláciu proteínov

• Poly(A) chvost ²⁵ stabilizuje mRNA a zvyšuje transláciu proteínov

• Modifikované nukleozidy ^9 , 48 znižujú prirodzenú imunitnú aktiváciu a zvyšujú transláciu

• Separačné a/alebo purifikačné techniky: ošetrenie RNázou III (NP a DW, nepublikované pozorovania) a purifikácia rýchlou proteínovou kvapalinovou chromatografiou (FPLC) ¹³ znižujú imunitnú aktiváciu a zvyšujú transláciu

• Optimalizácia sekvencie a/alebo kodónu ²⁹ zvyšuje transláciu

• Modulácia cieľových buniek: spoločné dodávanie faktorov iniciácie translácie a iných metód mení transláciu a imunogenicitu

Modulácia imunogenicity

Exogénna mRNA je inherentne imunostimulačná, pretože ju rozpoznávajú rôzne bunkové povrchové, endozomálne a cytosolické vrodené imunitné receptory ( obr. 1 ) (zhrnuté v odkaze 35 ). V závislosti od terapeutickej aplikácie môže byť táto vlastnosť mRNA prospešná alebo škodlivá. Je potenciálne výhodná pre vakcináciu, pretože v niektorých prípadoch môže poskytnúť adjuvantnú aktivitu na riadenie dozrievania dendritických buniek (DC), a tak vyvolať silné imunitné reakcie T a B buniek. Avšak vrodené imunitné snímanie mRNA je tiež spojené s inhibíciou expresie antigénu a môže negatívne ovplyvniť ^{imunitnú odpoveď9,13 .} Hoci paradoxné účinky vrodeného imunitného snímania na rôzne formáty mRNA vakcín nie sú úplne pochopené, v posledných rokoch sa dosiahol určitý pokrok v objasňovaní týchto javov.

Vrodené imunitné snímanie dvoch typov mRNA vakcíny dendritickou bunkou (DC), pričom RNA senzory sú znázornené žltou farbou, antigén červenou farbou, faktory dozrievania DC zelenou farbou a komplexy peptid-hlavný histokompatibilný komplex (MHC) svetlomodrou a červenou farbou; príklad lipidového nanočasticového nosiča je zobrazený vpravo hore. Je zobrazený neúplný zoznam hlavných známych RNA senzorov, ktoré prispievajú k rozpoznávaniu dvojvláknových a nemodifikovaných jednovláknových RNA. Nemodifikované, nepurifikované (časť 
a ) a nukleozidmi modifikované, rýchlou proteínovou kvapalinovou chromatografiou (FPLC) purifikované (časť 
b ) mRNA boli vybrané na ilustráciu dvoch formátov mRNA vakcín, kde sú prítomné a neprítomné známe formy snímania mRNA. Prerušovaná šípka predstavuje zníženú expresiu antigénu. Ag, antigén; PKR, interferónom indukovaná, dvojvláknová RNA-aktivovaná proteínkináza; MDA5, interferónom indukovaný proteín 1 obsahujúci doménu helikázy C (tiež známy ako IFIH1); IFN, interferón; mlΨ, 1-metylpseudouridín; OAS, 2′-5′-oligoadenylátsyntetáza; TLR, Toll-like receptor.

Obrázok v plnej veľkosti PowerPointová snímka

Štúdie za posledné desaťročie ukázali, že imunostimulačný profil mRNA môže byť formovaný čistením IVT mRNA a zavedením modifikovaných nukleozidov, ako aj komplexovaním mRNA s rôznymi nosnými molekulami ^{9 , 13 , 36 , 37} . Enzymaticky syntetizované prípravky mRNA obsahujú kontaminanty dvojvláknovej RNA (dsRNA) ako aberantné produkty IVT ^reakcie13 . Ako napodobenina vírusových genómov a replikačných medziproduktov je dsRNA silný molekulárny vzor spojený s patogénom (PAMP), ktorý je snímaný receptormi rozpoznávania vzorov vo viacerých bunkových kompartmentoch ( obr. 1 ). Rozpoznanie IVT mRNA kontaminovanej dsRNA má za následok robustnú produkciu interferónu typu ^I13 , ktorý upreguluje expresiu a aktiváciu proteínkinázy R (PKR; tiež známej ako EIF2AK2) a 2′-5′-oligoadenylátsyntetázy (OAS), čo vedie k inhibícii translácie RNAm a riboscelulárnej RNA39 inhibujúcej ^{transláciu39 .} , resp. Karikó a kolegovia ¹³ preukázali, že kontaminujúca dsRNA môže byť účinne odstránená z IVT mRNA chromatografickými metódami, ako je rýchla proteínová kvapalinová chromatografia s reverznou fázou (FPLC) alebo vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC). Prekvapivo sa ukázalo, že purifikácia pomocou FPLC zvyšuje produkciu proteínu z IVT mRNA až 1000-násobne v primárnych ľudských ^DC13 . Zdá sa teda, že vhodná purifikácia IVT mRNA je rozhodujúca pre maximalizáciu produkcie proteínu (imunogénu) v DC a pre zabránenie nežiaducej aktivácii vrodenej imunity.

Okrem kontaminantov dsRNA sú molekuly jednovláknovej mRNA samotné PAMP, keď sú exogénne dodávané do buniek. Jednovláknové oligoribonukleotidy a ich degradačné produkty sú detegované endozomálnymi senzormi Toll-like receptor 7 (TLR7) a TLR8 (Refs 40 , 41 ), čo vedie k produkcii interferónu typu ^I42 . Rozhodujúce je, že sa zistilo, že inkorporácia prirodzene sa vyskytujúcich chemicky modifikovaných nukleozidov, vrátane, ale nie výlučne, pseudouridínu ^{9 , 43 , 44} a 1-metylpseudouridínu ⁴⁵ , zabraňuje aktivácii TLR7, TLR8 a iných vrodených imunitných senzorov ^46 , 47 , čím sa redukuje signál interferónu typu ^I8 . ^{Nukleozidová} modifikácia ^{tiež čiastočne} potláča rozpoznávanie druhov ^{dsRNA46,47,48 .} V dôsledku toho Karikó a iní ukázali, že nukleozidmi modifikovaná mRNA sa in vitro ⁹ prekladá efektívnejšie ako nemodifikovaná mRNA , najmä v primárnych DC a in vivo u myší ⁴⁵ . Je pozoruhodné, že najvyššia úroveň produkcie proteínov v DC bola pozorovaná, keď bola mRNA purifikovaná FPLC aj modifikovaná ^{nukleozidmi13} . Tieto pokroky v porozumení zdrojov vrodeného imunitného snímania a spôsobu, ako sa vyhnúť ich nepriaznivým účinkom, podstatne prispeli k súčasnému záujmu o vakcíny na báze mRNA a terapiu náhrady proteínov.

Na rozdiel od zistení opísaných vyššie, štúdia Thessa a kolegov zistila, že sekvenčne optimalizovaná, HPLC purifikovaná, nemodifikovaná mRNA produkovala vyššie hladiny proteínu v HeLa bunkách a u myší ako jej nukleozidmi modifikovaný náprotivok ¹² . Okrem toho Kauffman a spolupracovníci preukázali, že nemodifikovaná mRNA nečistená pomocou HPLC poskytla robustnejšiu produkciu proteínov v bunkách HeLa ako mRNA modifikovaná nukleozidmi a viedla k podobným úrovniam produkcie proteínov u myší ⁴⁹ . Aj keď to nie je úplne jasné, nezrovnalosti medzi zisteniami Karikó ^9 , 13 a týmito autormi ^12 , 49 mohli vzniknúť v dôsledku variácií v optimalizácii sekvencie RNA, prísnosti purifikácie mRNA na odstránenie kontaminantov dsRNA a úrovne vrodeného imunitného snímania v cieľových typoch buniek.

Imunostimulačné vlastnosti mRNA možno naopak zvýšiť zahrnutím adjuvans na zvýšenie účinnosti niektorých formátov vakcín mRNA. Patria sem tradičné adjuvans, ako aj nové prístupy, ktoré využívajú vnútornú imunogenicitu mRNA alebo jej schopnosť kódovať imunomodulačné proteíny. Samoreplikujúce sa RNA vakcíny preukázali zvýšenú imunogenicitu a účinnosť po formulácii RNA v katiónovej nanoemulzii založenej na licencovanom adjuvans MF59 (Novartis) ⁵⁰ . Ďalšou účinnou adjuvantnou stratégiou je TriMix, kombinácia mRNA kódujúcich tri imunitné aktivačné proteíny: CD70, CD40 ligand (CD40L) a konštitutívne aktívny TLR4. TriMix mRNA zosilnila imunogenicitu nahej, nemodifikovanej, nepurifikovanej mRNA vo viacerých štúdiách vakcín proti rakovine a bola spojená najmä so zvýšenou maturáciou DC a odpoveďami cytotoxických T lymfocytov (CTL) (prehľad v odkaze 51 ). Ukázalo sa tiež, že typ nosiča mRNA a veľkosť komplexu mRNA-nosič modulujú cytokínový profil indukovaný dodaním mRNA. Napríklad vakcinačná platforma RNActive (CureVac AG) ^52 , 53 závisí od svojho nosiča, aby poskytoval adjuvantnú aktivitu. V tomto prípade je antigén exprimovaný z nahej, nemodifikovanej, sekvenčne optimalizovanej mRNA, zatiaľ ^čo adjuvantnú aktivitu poskytuje spoločne dodaná RNA v komplexe s protamínom (polykatiónový peptid), ktorý pôsobí prostredníctvom ^{signalizácie TLR752,54} . Tento formát vakcíny vyvolal priaznivé imunitné reakcie vo viacerých predklinických štúdiách na zvieratách na očkovanie proti rakovine a infekčným chorobám ^{18 , 36 , 55 , 56} . Nedávna štúdia poskytla mechanické informácie o adjuvancii vakcín RNActive u myší in vivo a ľudských buniek in ^vitro54 . Po intradermálnej imunizácii bola preukázaná silná aktivácia TLR7 (myš a človek) a TLR8 (človek) a produkcia interferónu typu I, prozápalových cytokínov a ^{chemokínov54} . Podobná adjuvantná aktivita bola tiež preukázaná v kontexte vakcín nezaložených na mRNA s použitím RNAdjuvantu (CureVac AG), nemodifikovanej, jednovláknovej RNA stabilizovanej katiónovým nosným ^peptidom57 .

Pokrok v dodávaní vakcíny mRNA

Účinné dodávanie mRNA in vivo je rozhodujúce pre dosiahnutie terapeutickej relevancie. Exogénna mRNA musí preniknúť cez bariéru lipidovej membrány, aby sa dostala do cytoplazmy, ktorá sa má translatovať na funkčný proteín. Zdá sa, že mechanizmy vychytávania mRNA sú závislé od typu bunky a fyzikálno-chemické vlastnosti komplexov mRNA môžu výrazne ovplyvniť dodávanie buniek a distribúciu orgánov. Existujú dva základné prístupy na dodávanie mRNA vakcín, ktoré boli doteraz opísané. Najprv nanesenie mRNA do DC ex vivo , po ktorom nasleduje opätovná infúzia transfekovaných ^buniek58 ; a po druhé, priama parenterálna injekcia mRNA s nosičom alebo bez nosiča. Ex vivo DC zaťaženie umožňuje presnú kontrolu bunkového cieľa, účinnosti transfekcie a iných bunkových podmienok, ale ako forma bunkovej terapie je to drahý a pracovne náročný prístup k vakcinácii. Priama injekcia mRNA je pomerne rýchla a nákladovo efektívna, ale zatiaľ neumožňuje presné a efektívne dodávanie špecifické pre bunkový typ, hoci v tomto ohľade sa nedávno dosiahol ^pokrok59 . Oba tieto prístupy boli preskúmané v rôznych formách ( obr. 2 ; tabuľka 1 ).

Bežne používané spôsoby dodávania a nosné molekuly pre mRNA vakcíny spolu s typickými priemermi pre časticové komplexy sú znázornené: nahá mRNA (časť a ); nahá mRNA s in vivo elektroporáciou (časť b ); mRNA s komplexom protamínu (katiónový peptid) (časť c ); mRNA spojená s kladne nabitou katiónovou nanoemulziou typu olej vo vode (časť d ); mRNA spojená s chemicky modifikovaným dendrimérom a v komplexe s polyetylénglykolom (PEG)-lipidom (časť e ); mRNA s protamínovým komplexom v PEG-lipidovej nanočastici (časť f ); mRNA asociovaná s katiónovým polymérom, ako je polyetylénimín (PEI) (časť g ); mRNA spojená s katiónovým polymérom, ako je PEI a lipidovou zložkou (časť h ); mRNA spojená s časticou alebo gélom polysacharidu (napríklad chitosan) (časť i ); mRNA v katiónovej lipidovej nanočastici (napríklad lipidy 1,2-dioleoyloxy-3-trimetylamóniumpropán (DOTAP) alebo dioleoylfosfatidyletanolamín (DOPE)) (časť j ); mRNA v komplexe s katiónovými lipidmi a cholesterolom (časť k ); a mRNA v komplexe s katiónovými lipidmi, cholesterolom a PEG-lipidom (časť 1 ).

PowerPointová snímka Obrázok v plnej veľkosti

Ex vivo zaťaženie DC. DC sú najsilnejšie bunky imunitného systému prezentujúce antigén. Iniciujú adaptívnu imunitnú odpoveď internalizáciou a proteolytickým spracovaním antigénov a ich prezentovaním CD8 ⁺ a CD4 ⁺ T bunkám na hlavných histokompatibilných komplexoch (MHC), konkrétne MHC triedy I a MHC triedy II , v tomto poradí. Okrem toho môžu DC prezentovať B bunkám intaktný antigén, aby vyvolali protilátkovú ^odpoveď60 . DC sú tiež vysoko prístupné transfekcii mRNA. Z týchto dôvodov DC predstavujú atraktívny cieľ pre transfekciu mRNA vakcínami, ako in vivo , tak aj ex vivo .

Hoci sa ukázalo, že DC internalizujú nahú mRNA prostredníctvom rôznych endocytických dráh ^{61 , 62 , 63} , účinnosť transfekcie ex vivo sa bežne zvyšuje pomocou elektroporácie; v tomto prípade molekuly mRNA prechádzajú cez membránové póry vytvorené vysokonapäťovým impulzom a priamo vstupujú do cytoplazmy (prehľad v odkaze 64 ). Tento prístup dodávania mRNA bol uprednostňovaný pre svoju schopnosť vytvárať vysokú účinnosť transfekcie bez potreby molekuly nosiča. DC, ktoré sú naplnené mRNA ex vivo, sa potom opätovne infúzia príjemcovi autológnej vakcíny, aby sa iniciovala imunitná odpoveď. Väčšina DC vakcín naplnených ex vivo vyvoláva prevažne bunkami sprostredkovanú imunitnú odpoveď; teda boli primárne používané na liečbu rakoviny (prehľad v odkaze 58 ).

Injekcia nahej mRNA in vivo. Nahá mRNA bola úspešne použitá na in vivo imunizácie, ^{najmä vo formátoch ,} ktoré prednostne cielia nabunky prezentujúce antigén, ako ^{pri intradermálnych61,65} a ^{intranodálnych injekciách66,67,68 .} Predovšetkým nedávna správa ukázala, že opakované intranodálne imunizácie s nahou, nemodifikovanou mRNA kódujúcou neoantigény spojené s nádorom vyvolali silné reakcie T buniek a zvýšili prežívanie bez progresie ⁶⁸ (ďalej diskutované v rámčeku 2 ).

Metódy fyzického podávania in vivo. Na zvýšenie účinnosti vychytávania mRNA in vivo sa občas použili fyzikálne metódy na preniknutie bunkovou membránou. Skorá správa ukázala, že mRNA v komplexe s časticami zlata by sa mohla exprimovať v tkanivách pomocou génovej pištole, mikroprojektilovej ^metódy69 . Ukázalo sa, že génová pištoľ je účinný spôsob dodávania RNA a vakcinácie na myšacích modeloch ^{70 , 71 , 72 , 73} , ale nie sú dostupné žiadne údaje o účinnosti u veľkých zvierat alebo ľudí. In vivo elektroporácia sa tiež použila na zvýšenie príjmu terapeutickej RNA ^{74 , 75 , 76} ; v jednej štúdii však elektroporácia zvýšila imunogenicitu iba samoamplifikujúcej sa RNA a nie nereplikujúcej sa vakcíny na báze ^mRNA74 . Fyzikálne metódy môžu byť obmedzené zvýšenou bunkovou smrťou a obmedzeným prístupom k cieľovým bunkám alebo tkanivám. V poslednej dobe sa v tejto oblasti namiesto toho uprednostňuje použitie nanočastíc na báze lipidov alebo polymérov ako účinných a všestranných nosičov.

Protamín. Ukázalo sa, že katiónový peptidový protamín chráni mRNA pred degradáciou sérovými ^RNázami77 ; avšak samotná mRNA s protamínovým komplexom preukázala obmedzenú proteínovú expresiu a účinnosť v modeli vakcíny proti rakovine, pravdepodobne v dôsledku príliš úzkej asociácie medziprotamínom ^{a mRNA36,78 .} Tento problém bol vyriešený vývojom vakcínovej platformy RNActive, v ktorej protamínovo formulovaná RNA slúži len ako imunitný aktivátor a nie ako expresný ^vektor52 .

Dodávanie na báze katiónových lipidov a polymérov. Vysoko účinné reagencie na transfekciu mRNA založené na katiónových lipidoch alebo polyméroch, ako je TransIT-mRNA (Mirus Bio LLC) alebo Lipofectamine (Invitrogen), sú komerčne dostupné a dobre fungujú v mnohých primárnych bunkách a rakovinových bunkových líniách ^9 , 13 , ale často vykazujú obmedzenú účinnosť in vivo alebo vysokú úroveň toxicity, nepublikované pozorovania (NP a D). Veľký pokrok sa dosiahol vo vývoji podobne navrhnutých komplexotvorných činidiel na bezpečné a účinné použitie in vivo a tieto sú podrobne diskutované v niekoľkých nedávnych prehľadoch ^{10 , 11 , 79 , 80} . Katiónové lipidy a polyméry, vrátane dendrimérov, sa v posledných rokoch stali široko používanými nástrojmi na podávanie mRNA. Pole mRNA jednoznačne profitovalo zo značnej investície do podávania malej interferujúcej RNA (siRNA) in vivo , kde sa tieto dodávacie vehikulá používali už viac ako desať rokov. Lipidové nanočastice (LNP) sa stali jedným z najatraktívnejších a bežne používaných nástrojov na dodávanie mRNA. LNP často pozostávajú zo štyroch zložiek: ionizovateľného katiónového lipidu, ktorý podporuje samouskladanie do častíc veľkosti vírusu (~100 nm) a umožňuje endozomálne uvoľňovanie mRNA do cytoplazmy; polyetylénglykol viazaný na lipidy (PEG), ktorý zvyšuje polčas rozpadu formulácií; cholesterol, stabilizačné činidlo; a prirodzene sa vyskytujúce fosfolipidy, ktoré podporujú štruktúru lipidovej dvojvrstvy. Početné štúdie preukázali účinné in vivo dodávanie siRNA prostredníctvom LNP (zhrnuté v odkaze 81 ), ale len nedávno sa ukázalo, že LNP sú účinnými nástrojmi na in vivo dodávanie samoamplifikujúcej sa RNA ¹⁹ a konvenčnej, nereplikujúcej sa mRNA ²¹ . Systémovo podávané komplexy mRNA-LNP sa zameriavajú hlavne na pečeň v dôsledku väzby apolipoproteínu E a následného vychytávania hepatocytmi sprostredkovaného receptorom82 ^a ukázalo sa, že intradermálne, intramuskulárne a subkutánne podanie spôsobuje predĺženú expresiu proteínuv ^{mieste injekcie21,22 .} Mechanizmy úniku mRNA do cytoplazmy nie sú úplne pochopené, a to nielen pre umelé lipozómy, ale aj pre prirodzene sa vyskytujúce ^exozómy83 . Ďalší výskum v tejto oblasti bude pravdepodobne veľkým prínosom pre oblasť terapeutickej dodávky RNA.

Veľkosť a trvanie produkcie proteínov in vivo z vakcín mRNA-LNP možno čiastočne kontrolovať zmenou spôsobu podávania. Ukázalo sa, že intramuskulárne a intradermálne podanie mRNA-LNP vedie k trvalejšej expresii proteínov ako systémové cesty podania: v jednom experimente bol polčas luciferázy svetlušiek kódovanej mRNA zhruba trikrát dlhší po intradermálnej injekcii ako po intravenóznom ^podaní21 . Táto kinetika expresie mRNA-LNP môže byť priaznivá na vyvolanie imunitných reakcií. Nedávna štúdia preukázala, že trvalá dostupnosť antigénu počas očkovania bola hnacou silou vysokých titrov protilátok a reakcií B buniek a T folikulárnych pomocných buniek (T _{FH )} ⁸⁴ . Tento proces bol potenciálne prispievajúcim faktorom k účinnosti nedávno opísaných nukleozidmi modifikovaných mRNA-LNP vakcín podávaných intramuskulárnou a intradermálnou cestou ^{20 , 22 , 85} . V skutočnosti boli T _FH bunky identifikované ako kritická populácia imunitných buniek, ktoré musia vakcíny aktivovať, aby vytvorili silné a dlhotrvajúce neutralizačné protilátkové reakcie, najmä proti vírusom, ktoré sa vyhýbajú humorálnej imunite86 ^. Dynamika GC reakcie a diferenciácia T _FH buniek nie je úplne pochopená a pokrok v týchto oblastiach by bol nepochybne plodný pre budúci návrh vakcíny ( rámček 3 ).

Rámček 2: Personalizované neoepitopové vakcíny proti rakovine

Sahin a kolegovia sú priekopníkmi používania individualizovaných neoepitopových mRNA vakcín proti rakovine ¹²¹ . Používajú vysokovýkonné sekvenovanie na identifikáciu každej jedinečnej somatickej mutácie vzorky nádoru jednotlivého pacienta, ktorá sa nazýva mutanóm. To umožňuje racionálny návrh vakcín proti neoepitopovej rakovine spôsobom špecifickým pre pacienta a má tú výhodu, že sa zameriava na nevlastné antigénne špecificity, ktoré by nemali byť eliminované centrálnymi tolerančnými mechanizmami. Nedávno bol predložený dôkaz koncepcie: Kreiter a kolegovia zistili, že podstatná časť nesynonymných rakovinových mutácií bola imunogénna, keď bola dodaná mRNA a bola rozpoznaná hlavne CD4 ⁺ T ^bunkami176 . Na základe týchto údajov vytvorili výpočtovú metódu na predpovedanie neoepitopov obmedzených na hlavný histokompatibilný komplex (MHC) triedy II, ktoré možno použiť ako imunogény vakcín. mRNA vakcíny kódujúce takéto neoepitopy kontrolovali rast nádoru v myšacích modeloch B16-F10 melanómu a CT26 rakoviny hrubého čreva. V nedávnej klinickej štúdii Sahin a kolegovia vyvinuli personalizované mRNA vakcíny založené na neoepitopoch pre 13 pacientov s metastatickým melanómom, rakovinou známou vysokou frekvenciou somatických mutácií, a teda neoepitopov. Imunizovali sa proti desiatim neoepitopom na jednotlivca intranodálnou injekciou nahej mRNA. Reakcie CD4 ⁺ T buniek sa zistili proti väčšine neoepitopov a po niekoľkých mesiacoch sledovania sa pozorovala nízka frekvencia metastatického ochorenia68 ^. Je zaujímavé, že podobné výsledky sa získali aj v štúdii analogického dizajnu, ktorá používala syntetické peptidy ako imunogény a nie ^mRNA177 . Spoločne tieto nedávne štúdie naznačujú potenciálnu užitočnosť metodiky personalizovanej vakcíny.

Rámček 3: Zárodočné centrum a T folikulárne pomocné bunky

Prevažná väčšina účinných antimikrobiálnych vakcín vyvoláva dlhotrvajúce ochranné protilátkové reakcie proti cieľovému patogénu. Protilátky s vysokou afinitou sa produkujú na špecializovaných mikroanatomických miestach v B bunkových folikuloch sekundárnych lymfoidných orgánov nazývaných germinálne centrá (GC). V GC dochádza k proliferácii B buniek, somatickej hypermutácii a selekcii na mutanty s vysokou afinitou a pre tieto procesy je potrebná účinná pomoc T buniek178 ^. Charakterizácia vzťahu medzi GC B a T bunkami bola v posledných rokoch aktívne študovaná. Folikulárny navádzací receptor CXC-chemokínový receptor 5 (CXCR5) bol identifikovaný na GC B a T bunkách v 90. rokoch 19. storočia ^179 , 180 , ale koncept špecifickej línie T folikulárnych pomocných buniek (T _FH ) bol navrhnutý až v roku 2000 (odkazy 1821 , 180 ). Existencia T _FH línie bola potvrdená v roku 2009, keď bol identifikovaný transkripčný faktor špecifický pre T _FH bunky, B bunkový lymfómový proteín 6 (BCL-6) , ^{183 , 184 , 185} . T _FH bunky predstavujú špecializovanú podskupinu CD4 ⁺ T buniek, ktoré produkujú kritické signály pre prežitie, proliferáciu a diferenciáciu B buniek okrem signálov na zmenu izotypov protilátok a na zavedenie diverzifikačných mutácií do imunoglobulínových génov. Hlavné cytokíny produkované T _FH bunkami sú interleukín-4 (IL-4) a IL-21, ktoré hrajú kľúčovú úlohu pri riadení GC reakcie. Ďalšie dôležité markery a funkčné ligandy exprimované T _FH bunkami zahŕňajú CD40 ligand (CD40L), proteín 1A obsahujúci doménu Src homológnej domény 2 (SH2) (SH2D1A), proteín programovanej bunkovej smrti 1 (PD1) a indukovateľný kostimulátor T buniek (ICOS) ¹⁸⁶ . Charakterizácia zriedkavých, široko neutralizujúcich protilátok proti HIV-1 odhalila, že nezvyčajne vysoké miery somatickej hypermutácie sú charakteristickým znakom ochranných protilátkových reakcií proti HIV-1 (odkaz 187 ). Keďže T _FH bunky hrajú kľúčovú úlohu pri riadení tohto procesu v GC reakciách, je naliehavo potrebný vývoj nových adjuvans alebo vakcínových platforiem, ktoré môžu silne aktivovať tento typ buniek.

mRNA vakcíny proti infekčným chorobám

Vývoj profylaktických alebo terapeutických vakcín proti infekčným patogénom je najúčinnejším prostriedkom na potlačenie a prevenciu epidémií. Avšak konvenčné vakcínové prístupy do značnej miery zlyhali pri výrobe účinných vakcín proti náročným vírusom, ktoré spôsobujú chronické alebo opakované infekcie, ako je HIV-1, vírus herpes simplex a respiračný syncyciálny vírus (RSV). Okrem toho pomalé tempo vývoja a schvaľovania komerčných vakcín nie je dostatočné na to, aby reagovalo na rýchly výskyt akútnych vírusových ochorení, ako to dokazujú prepuknutia vírusov Ebola a Zika v rokoch 2014–2016. Preto je rozhodujúci vývoj silnejších a všestrannejších očkovacích platforiem.

Predklinické štúdie vytvorili nádej, že mRNA vakcíny budú spĺňať mnohé aspekty ideálnej klinickej vakcíny: preukázali priaznivý bezpečnostný profil u zvierat, sú všestranné a rýchlo sa navrhujú pre vznikajúce infekčné choroby a sú prístupné pre výrobu škálovateľnej správnej výrobnej praxe (GMP) (už prebieha v niekoľkých spoločnostiach). ^Na rozdiel od proteínovej imunizácie niekoľko formátov mRNA vakcín indukuje silné reakcie CD8 ⁺ T – buniek, ^{pravdepodobne} vďaka účinnej prezentácii endogénne produkovaných antigénov na molekulách MHC triedy I, okrem silných reakcií CD4 ^{+ T – buniek56,87,88 .} Okrem toho, na rozdiel od imunizácie DNA, mRNA vakcíny preukázali schopnosť vytvárať silné neutralizačné protilátkové reakcie u zvierat iba s jednou alebo dvoma imunizáciami s nízkou ^{dávkou20 , 22 , 85} . V dôsledku toho mRNA vakcíny vyvolali ochrannú imunitu proti rôznym infekčným agens na zvieracích modeloch ^{19 , 20 , 22 , 56 , 89 , 90,} a preto vyvolali značný optimizmus. Nedávno publikované výsledky z dvoch klinických skúšok mRNA vakcín proti infekčným chorobám však boli trochu skromné, čo viedlo k opatrnejším očakávaniam o prenose predklinického úspechu na kliniku ^22 , 91 (diskutované nižšie).

Proti infekčným patogénom sa použili dva hlavné typy RNA vakcín: samoamplifikujúce alebo replikónové RNA vakcíny a nereplikujúce sa mRNA vakcíny. Nereplikujúce sa mRNA vakcíny sa môžu ďalej rozlíšiť podľa spôsobu ich dodávania: ex vivo nanesenie DC alebo priama in vivo injekcia do rôznych anatomických miest. Ako je uvedené nižšie, v poslednej dobe bol publikovaný rýchlo rastúci počet predklinických štúdií v týchto oblastiach a niekoľko z nich vstúpilo do klinických štúdií na ľuďoch ( tabuľka 2 ).

Tabuľka 2 Klinické štúdie s mRNA vakcínami proti infekčným chorobám

Sponzorská inštitúcia	Typ vakcíny (spôsob podania)	Ciele	Skúšobné čísla (fáza)	Stav
Argos Therapeutics	DC EP s autológnymi vírusovými Ag a CD40L mRNA (id)	HIV-1	• NCT00672191 (II)• NCT01069809 (II)• NCT02042248 (I)	• Dokončené 105• Dokončené; výsledky NA• Dokončené; výsledky NA
CureVac AG	RNAktívna vírusová Ag mRNA (im, id)	Vírus besnoty	NCT02241135 (I)	Aktívne 56 , 91
Erasmus Medical Center	DC nabité vírusovou Ag mRNA s TriMix (i.nod.)	HIV-1	NCT02888756 (II)	Nábor
Fundació Clinic na Recerca Biomèdica	Vírusová Ag mRNA s TriMix (NA)	HIV-1	NCT02413645 (I)	Aktívne
Massachusetts General Hospital	DC nabité vírusovou Ag mRNA (id)	HIV-1	NCT00833781 (II)	Dokončené 104
Zdravotné stredisko McGill University	DC EP s autológnymi vírusovými Ag a CD40L mRNA (id)	HIV-1	NCT00381212 (I/II)	Dokončené 102
Moderná terapia	Nukleozidmi modifikovaná vírusová Ag mRNA (im)	vírus zika	NCT03014089 (I/II)	Nábor 85
		Vírus chrípky	NCT03076385 (I)	Priebežne 22

1. V tabuľke sú zhrnuté klinické štúdie zaregistrované na ClinicalTrials.gov k 5. máju 2017. Ag, antigén; CD40L, CD40 ligand; DC, dendritická bunka; EP, elektroporované; id, intradermálne; im, intramuskulárne; i.nod., intranodálne; NA, nie je k dispozícii.

PowerPointová snímka

Samoamplifikačné mRNA vakcíny

Väčšina v súčasnosti používaných vakcín so samoamplifikujúcou mRNA (SAM) je založená na alfavírusovom genóme92 ^, kde gény kódujúce mechanizmus replikácie RNA sú nedotknuté, ale gény kódujúce štrukturálne proteíny sú nahradené požadovaným antigénom. Plná RNA je dlhá ~ 9 kb a môže byť ľahko produkovaná IVT z DNA templátu. Platforma SAM umožňuje produkciu veľkého množstva antigénu z extrémne malej dávky vakcíny vďaka intracelulárnej replikácii RNA kódujúcej antigén. Skorá štúdia uviedla, že imunizácia 10 μg nahej vakcíny SAM kódujúcej fúziu RSV (F), hemaglutinín vírusu chrípky (HA) alebo premembránové a obalové (prM-E) proteíny luping ill vírusu viedli k protilátkovým odpovediam a čiastočnej ochrane pred letálnymi vírusovými infekciami u myší ⁹³ . Vývoj RNA komplexotvorných činidiel priniesol pozoruhodné zlepšenie účinnosti SAM vakcín. Len 100 ng RNA replikónovej vakcíny kódujúcej RSV F, v komplexe s LNP, viedlo k silným imunitným reakciám T a B buniek u myší a 1 μg vyvolalo ochranné imunitné reakcie proti infekcii RSV v intranazálnom provokačnom systéme potkana bavlníka ¹⁹ . Vakcíny SAM kódujúce antigény vírusu chrípky v LNP alebo katiónová nanoemulzia typu olej vo vode vyvolali silné imunitné reakcie u fretiek a poskytli ochranu pred homológnou a heterológnou vírusovou infekciou u myší ^{94 , 95 , 96} . Ďalšie štúdie preukázali imunogenicitu tejto vakcínovej platformy proti rôznym vírusom u viacerých druhov, vrátane ľudského cytomegalovírusu (CMV), vírusu hepatitídy C a vírusu besnoty u myší, HIV-1 u králikov a HIV-1 a ľudskej CMV u makakov ^{rhesus50 , 87 , 97} . Replikónová RNA kódujúca chrípkové antigény v komplexe s LNP obsahujúcimi chitosan alebo polyetylénimín (PEI) vyvolala u myší po subkutánnom podaní imunitné reakcie T a ^{B buniek98,99 .} Chahal a kolegovia vyvinuli aplikačnú platformu pozostávajúcu z chemicky modifikovaného, ​​ionizovateľného dendriméru v komplexe do LNP ⁸⁹ . Pomocou tejto platformy preukázali, že intramuskulárne podanie replikónov RNA kódujúcich antigény vírusu chrípky, vírusu Ebola alebo Toxoplasma gondii chránilo myši pred smrteľnou infekciou89 ^. Tá istá skupina nedávno preukázala, že vakcinácia RNA replikónom kódujúcim vírus Zika prM-E formulovaným rovnakým spôsobom vyvolala u myší odpovede antigén-špecifickej protilátky a CD8 ^{+ T buniek88} . Ďalšia nedávna štúdia uvádza imunogenicitu a miernu ochrannú účinnosť vakcín SAM proti bakteriálnym patogénom, menovite Streptococcus(skupiny A a B) spp., čo ďalej demonštruje všestrannosť tejto platformy ¹⁰⁰ .

Jednou z výhod vakcín SAM je, že vytvárajú svoje vlastné adjuvans vo forme štruktúr dsRNA, replikačných medziproduktov a iných motívov, ktoré môžu prispieť k ich vysokej účinnosti. Avšak vnútorná povaha týchto PAMP môže sťažiť moduláciu zápalového profilu alebo reaktogenity SAM vakcín. Okrem toho sú obmedzenia veľkosti inzertu väčšie pre vakcíny SAM ako pre mRNA, ktoré nekódujú replikónové gény, a imunogenicita replikačných proteínov môže teoreticky obmedzovať opakované použitie.

mRNA vakcíny dendritických buniek

Ako je opísané vyššie, ex vivo zavedenie DC je intenzívne využívaná metóda na vytvorenie bunkovo ​​sprostredkovanej imunity proti rakovine. Vývoj vakcín proti infekčným chorobám s použitím tohto prístupu sa obmedzil najmä na terapeutickú vakcínu proti HIV-1: jedinci infikovaní HIV-1 na vysoko aktívnej antiretrovírusovej terapii boli liečení autológnymi DC elektroporovanými mRNA kódujúcou rôzne antigény HIV-1 a boli hodnotené bunkové imunitné odpovede ^{101 , 102 , 103 , 104 , 105 , 106.} Tento zákrok sa ukázal ako bezpečný a vyvolal antigén-špecifické odpovede CD4 ⁺ a CD8 ⁺ T buniek, ale nebol pozorovaný žiadny klinický prínos. Ďalšia štúdia na ľuďoch hodnotila očkovanie DC s mRNA CMV pp65 u zdravých ľudských dobrovoľníkov a príjemcov alogénnych kmeňových buniek a zaznamenala indukciu alebo expanziu bunkových imunitných odpovedí špecifických pre CMV ¹⁰⁷ .

Priama injekcia nereplikujúcich sa mRNA vakcín

Priamo injekčné, nereplikujúce sa mRNA vakcíny sú príťažlivým formátom vakcíny vďaka ich jednoduchému a ekonomickému podávaniu, najmä v prostredí s obmedzenými zdrojmi. Hoci skorá správa preukázala, že imunizácia mRNA kódujúcou nukleoproteíny chrípkového vírusu v komplexe s lipozómami vyvolala CTL reakcie u myší108 ^, prvá demonštrácia ochranných imunitných reakcií mRNA vakcínami proti infekčným patogénom bola publikovaná len pred niekoľkými ^rokmi18 . Táto kľúčová práca ukázala, že intradermálne podaná nekomplexovaná mRNA kódujúca rôzne antigény vírusu chrípky v kombinácii s adjuvans RNA s komplexom protamínu bola imunogénna na viacerých zvieracích modeloch a chránila myši pred letálnou vírusovou infekciou.

Imunizácia platformou RNActive na báze protamínu kódujúcou glykoproteín vírusu besnoty tiež vyvolala ochrannú imunitu proti letálnej infekcii intracerebrálnym vírusom u myší a silným neutralizačným protilátkovým reakciám u ^{ošípaných56} . V nedávno publikovanej zásadnej práci Alberer a kolegovia hodnotili bezpečnosť a imunogenicitu tejto vakcíny u 101 zdravých ľudských ^{dobrovoľníkov91} . Subjekty dostali 80–640 μg mRNA vakcíny trikrát injekčnou striekačkou s ihlou alebo zariadeniami bez ihly, buď intradermálne alebo intramuskulárne. Sedem dní po očkovaní takmer všetci účastníci hlásili mierne až stredne závažné reakcie v mieste vpichu a 78 % zaznamenalo systémovú reakciu (napríklad horúčku, bolesť hlavy a zimnicu). Vyskytla sa jedna závažná nežiaduca udalosť, ktorá pravdepodobne súvisela s vakcínou: prechodný a stredne ťažký prípad Bellovej obrny. Prekvapivo, injekcie injekčnej striekačky s ihlou nevytvorili detegovateľné neutralizačné protilátky u 98 % príjemcov. Na rozdiel od toho podávanie bez ihly vyvolalo premenlivé hladiny neutralizačných protilátok, z ktorých väčšina dosiahla vrchol nad očakávaným ochranným prahom, ale potom sa do značnej miery znížila po 1 roku u jedincov, ktorí boli dlhodobo sledovaní. Objasnenie základu rozdielnej imunogenicity medzi zvieratami a ľuďmi, ktorí dostali túto vakcínu, a medzi dvoma cestami podávania bude informatívne pre budúci návrh vakcíny s použitím tejto platformy.

Iné vakcíny proti infekčným chorobám úspešne využívajú dodávacie systémy na báze lipidov alebo polymérov. Katiónový 1,2-dioleoyloxy-3-trimetylamóniumpropán (DOTAP) a mRNA s komplexom lipidov dioleoylfosfatidyletanolamínu (DOPE) kódujúca HIV-1 gag generovala antigén-špecifické CD4 ⁺ a CD8 ⁺ T-bunkové reakcie po subkutánnom podaní u ^myší109 . Dve ďalšie štúdie preukázali, že mRNA s komplexom PEI by sa mohli účinne dodávať myšiam na vyvolanie imunitných reakcií špecifických pre HIV-1: subkutánne podaná mRNA kódujúca HIV-1 gag vyvolala reakcie CD4 ⁺ a CD8 ⁺ T buniek a intranazálne podaná mRNA kódujúca obalovú odpoveď gp120 gp120 v podjednotke nasového epitelu prekročila imunitnú dutinu nosnej dutiny. ^110 , 111 . Kranz a kolegovia tiež vykonali intravenóznu imunizáciu u myší pomocou mRNA s lipidovým komplexom kódujúcej HA vírusu chrípky a preukázali aktiváciu T buniek po jednej ^dávke59 .

Nukleozidmi modifikované mRNA vakcíny predstavujú novú a vysoko účinnú kategóriu mRNA vakcín. Vďaka novosti tejto imunizačnej platformy sú naše poznatky o účinnosti obmedzené na výsledky štyroch nedávnych publikácií, ktoré demonštrovali účinnosť takýchto vakcín u malých a veľkých zvierat. Prvá publikovaná správa preukázala, že jediná intradermálna injekcia mRNA formulovanej s LNP kódujúcou vírus Zika prM-E, modifikovaná 1-metylpseudouridínom a purifikáciou FPLC, vyvolala ochranné imunitné reakcie u myší a makakov rhesus s použitím len 50 μg (0,02 mg kg ^/ 2 makakov ) Následná štúdia inej skupiny testovala podobne navrhnutú vakcínu proti vírusu Zika na myšiach a zistila, že jediná intramuskulárna imunizácia vyvolala mierne imunitné reakcie a posilňovacia vakcinácia viedla k silným a ochranným imunitným reakciám85 ^. Táto vakcína tiež obsahovala modifikovaný nukleozid 1-metylpseudouridín, ale purifikácia FPLC alebo iné metódy odstraňovania kontaminantov dsRNA neboli opísané. Táto správa predovšetkým ukázala, že zosilnenie sekundárnej infekcie heterológnym flavivírusom, ktoré je hlavným problémom vakcín proti vírusu dengue a Zika, závislé od protilátok, by sa mohlo znížiť odstránením skrížene reaktívneho epitopu v proteíne E. Nedávna následná štúdia hodnotila rovnakú vakcínu na modeli očkovania matky a infekcie plodu112 ^. Dve imunizácie znížili infekciu vírusom Zika u fetálnych myší o niekoľko rádov a úplne zachránili defekt životaschopnosti plodu.

Ďalšia nedávna správa hodnotila imunogenicitu LNP-komplexovaných, nukleozidmi modifikovaných, FPLC nečistených mRNA vakcín proti chrípkovým HA 10 neuraminidázovým vírusom 8 (H10N8) a H7N9 chrípkovým vírusom u myší, fretiek, primátov (okrem človeka) a po prvýkrát aj u ^ľudí22 . Jediná intradermálna alebo intramuskulárna imunizácia nízkymi dávkami (0,4–10 μg) mRNA kódujúcej HA vírusu chrípky s komplexom LNP vyvolala u myší ochranné imunitné reakcie proti homológnej infekcii vírusom chrípky. Podobné výsledky sa získali u fretiek a opíc cynomolgus po imunizácii jednou alebo dvoma dávkami 50–400 μg vakcíny obsahujúcej LNP-komplexnú mRNA kódujúcu HA, čo potvrdzuje, že účinnosť vakcín mRNA–LNP sa prenáša na väčšie zvieratá, vrátane primátov (okrem človeka).

Na základe povzbudivých predklinických údajov sa nedávno začali dve klinické štúdie fázy I, aby sa po prvýkrát vyhodnotila imunogenicita a bezpečnosť vakcín mRNA-LNP modifikovaných nukleozidmi u ľudí. Vakcína mRNA kódujúca H10N8 HA v súčasnosti prechádza klinickým testovaním (NCT03076385) a boli hlásené predbežné zistenia pre 23 očkovaných jedincov22 ^. Účastníci dostali malé množstvo (100 μg) vakcíny intramuskulárne a imunogenicita sa merala 43 dní po očkovaní. Ukázalo sa, že vakcína je imunogénna u všetkých subjektov, ako bolo merané pomocou hemaglutinačnej inhibície a mikroneutralizačných protilátok. Sľubne boli titre protilátok nad očakávaným ochranným prahom, ale boli mierne nižšie ako na zvieracích modeloch. Podobne ako v štúdii Alberera a kol . ⁹¹ väčšina očkovaných subjektov hlásila miernu až strednú reaktogenitu (bolesť v mieste vpichu, myalgia, bolesť hlavy, únava a triaška) a tri subjekty hlásili závažné reakcie v mieste vpichu alebo systémovú reakciu podobnú bežnému prechladnutiu. ^{Zdá sa ,} že táto úroveň reaktogenity je podobná ako u tradičnejších formátov ^{vakcín113,114} . Nakoniec vakcína proti vírusu Zika opísaná Richnerom a kol . ^85 , 112 tiež vstupuje do klinického hodnotenia v kombinovanom skúšaní fázy I/II (NCT03014089). Budúce štúdie, ktoré aplikujú vakcíny mRNA-LNP modifikované nukleozidmi proti väčšej rozmanitosti antigénov, odhalia, do akej miery je táto stratégia široko aplikovateľná na vakcíny proti infekčným chorobám.

mRNA vakcíny proti rakovine

Vakcíny proti rakovine založené na mRNA boli nedávno a rozsiahlo preskúmané ^{115 , 116 , 117 , 118 , 119} . Nižšie sú zvýraznené najnovšie pokroky a pokyny. Vakcíny proti rakovine a iné imunoterapie predstavujú sľubné alternatívne stratégie na liečbu malignít. Vakcíny proti rakovine môžu byť navrhnuté tak, aby sa zamerali na antigény spojené s nádorom, ktoré sú prednostne exprimované v rakovinových bunkách, napríklad rastové faktory alebo antigény, ktoré sú jedinečné pre malígne bunky v dôsledku somatickej ^mutácie120 . Tieto neoantigény alebo neoepitopy v nich obsiahnuté boli nasadené ako ciele mRNA vakcíny u ľudí ¹²¹ ( rámček 2 ). Väčšina vakcín proti rakovine je skôr terapeutická než profylaktická a snaží sa stimulovať bunkami sprostredkované reakcie, ako sú tie z CTL, ktoré sú schopné vyčistiť alebo znížiť nádorovú záťaž122 ^. Prvé štúdie proof-of-concept, ktoré nielen navrhli myšlienku vakcín proti rakovine RNA, ale poskytli aj dôkazy o uskutočniteľnosti tohto prístupu, boli publikované pred viac ako dvoma desaťročiami ^123 , 124 . Odvtedy mnohé predklinické a klinické štúdie preukázali životaschopnosť mRNA vakcín v boji proti rakovine ( tabuľka 3 ).

Tabuľka 3 Klinické štúdie s mRNA vakcínami proti rakovine

Sponzorská inštitúcia	Typ vakcíny (spôsob podania)	Ciele	Skúšobné čísla (fáza)	Stav
Univerzitná nemocnica v Antverpách	DC EP s TAA mRNA (id alebo NA)	AML	• NCT00834002 (I)• NCT01686334 (II)	• Dokončené 206 , 207• Nábor zamestnancov
		AML, CML, mnohopočetný myelóm	NCT00965224 (II)	Neznámy
		Viacnásobné solídne nádory	NCT01291420 (I/II)	Neznámy 208
		mezotelióm	NCT02649829 (I/II)	Nábor
		Glioblastóm	NCT02649582 (I/II)	Nábor
Argos Therapeutics	DC EP s autológnou nádorovou mRNA s alebo bez CD40L mRNA (id alebo NA)	Renálny bunkový karcinóm	• NCT01482949 (II)• NCT00678119 (II)• NCT00272649 (I/II)• NCT01582672 (III)• NCT00087984 (I/II)	• Priebežne• Dokončené 209• Dokončené; výsledky NA• Priebežne• Dokončené; výsledky NA
		Rakovina pankreasu	NCT00664482 (NA)	Dokončené; výsledky NA
Bioterapeutiká Asterias	DC nabité TAA mRNA (NA)	AML	NCT00510133 (II)	Dokončené 210
BioNTech RNA Pharmaceuticals GmbH	Nahá TAA alebo neo-Ag mRNA (i.nod.)	Melanóm	• NCT01684241 (I)• NCT02035956 (I)	• Dokončené; výsledky NA• Priebežne
	TAA mRNA s lipozómovým komplexom (iv)	Melanóm	NCT02410733 (I)	Nábor 59
	TAA a neo-Ag mRNA formulovaná v lipozómoch (iv)	Rakovina prsníka	NCT02316457 (I)	Nábor
CureVac AG	RNaktívna TAA mRNA (id)	Nemalobunkový karcinóm pľúc	• NCT00923312 (I/II)• NCT01915524 (I)	• Dokončené 211• Ukončené 200
		Rakovina prostaty	• NCT02140138 (II)• NCT00831467 (I/II)• NCT01817738 (I/II)	• Ukončené• Dokončené 151• Ukončené 212
Duke University	DC nabité CMV Ag mRNA (id alebo ing.)	Glioblastóm, malígny glióm	• NCT00626483 (I)• NCT00639639 (I)• NCT02529072 (I)• NCT02366728 (II)	• Priebežne 213• Priebežne 138 , 139• Nábor zamestnancov• Nábor zamestnancov
	DC nabité autológnou nádorovou mRNA (id)	Glioblastóm	NCT00890032 (I)	Dokončené; výsledky NA
	DC, zrelé, naplnené TAA mRNA (i.nod.)	Melanóm	NCT01216436 (I)	Ukončené
Mozgová nemocnica Guangdong 999	DC nabité TAA mRNA (NA)	Glioblastóm	• NCT02808364 (I/II)• NCT02709616 (I/II)	• Nábor zamestnancov• Nábor zamestnancov
		Mozgové metastázy	NCT02808416 (I/II)	Nábor
Nemocnica Herlev	DC nabité TAA mRNA (id)	Rakovina prsníka, melanóm	NCT00978913 (I)	Dokončené 214
		Rakovina prostaty	NCT01446731 (II)	Dokončené 215
Life Research Technologies GmbH	DC, zrelé, naplnené TAA mRNA (NA)	Rakovina vaječníkov	NCT01456065 (I)	Neznámy
Univerzita Ľudovíta Maximiliána v Mníchove	DC nabité TAA a CMV Ag mRNA (id)	AML	NCT01734304 (I/II)	Nábor
MD Anderson Cancer Center	DC naplnené lyzátom AML a mRNA (NA)	AML	NCT00514189 (I)	Ukončené
Pamätník Sloan Kettering Cancer Center	DC (Langerhans) EP s TAA mRNA (id)	Melanóm	NCT01456104 (I)	Prebieha
		Mnohopočetný myelóm	NCT01995708 (I)	Nábor
Univerzitná nemocnica Oslo	DC nabité autológnym nádorom alebo TAA mRNA (id alebo NA)	Melanóm	• NCT00961844 (I/II)• NCT01278940 (I/II)	• Ukončené• Dokončené 216
		Rakovina prostaty	• NCT01197625 (I/II)• NCT01278914 (I/II)	• Nábor zamestnancov• Dokončené; výsledky NA
		Glioblastóm	NCT00846456 (I/II)	Dokončené 217
		Rakovina vaječníkov	NCT01334047 (I/II)	Ukončené
Radboudova univerzita	DC EP s TAA mRNA (id a iv alebo i.nod)	Kolorektálny karcinóm	NCT00228189 (I/II)	Dokončené 218
		Melanóm	• NCT00929019 (I/II)• NCT00243529 (I/II)• NCT00940004 (I/II)• NCT01530698 (I/II)• NCT02285413 (II)	• Ukončené• Dokončené 219 , 220• Dokončené 220 , 221• Dokončené 144 , 220 , 221• Dokončené; výsledky NA
Universitair Ziekenhuis Brussel	DC EP s TAA a TriMix mRNA (id a iv)	Melanóm	• NCT01066390 (I)• NCT01302496 (II)• NCT01676779 (II)	• Dokončené 137• Dokončené 140• Dokončené; výsledky NA
Univerzitná nemocnica Erlangen	DC, zrelé, naplnené autológnou nádorovou RNA (iv)	Melanóm	NCT01983748 (III)	Nábor
Univerzitná nemocnica Tübingen	Autológna nádorová mRNA s proteínom GM-CSF (id a sc)	Melanóm	NCT00204516 (I/II)	Dokončené 222
	TAA mRNA v protamínovom komplexe s proteínom GM-CSF (id a sc)	Melanóm	NCT00204607 (I/II)	Dokončené 150
Univerzita Campinas, Brazília	DC nabité TAA mRNA (NA)	AML, myelodysplastické syndrómy	NCT03083054 (I/II)	Nábor
University of Florida	RNActive * TAA mRNA (id)	Rakovina prostaty	NCT00906243 (I/II)	Ukončené
	DC nabité CMV Ag mRNA s GM-CSF proteínom (id)	Glioblastóm, malígny glióm	NCT02465268 (II)	Nábor

1. V tabuľke sú zhrnuté klinické štúdie zaregistrované na ClinicalTrials.gov k 5. máju 2017. Ag, antigén; AML, akútna myeloidná leukémia; CD40L, CD40 ligand; CML, chronická myeloidná leukémia; CMV, cytomegalovírus; DC, dendritická bunka; EP, elektroporované; GM-CSF, faktor stimulujúci kolónie granulocytov a makrofágov; id, intradermálne; inguinálna injekcia; i.nod., intranodálna injekcia; iv, intravenózne; NA, nie je k dispozícii; neo-Ag, personalizovaný neoantigén; sc, subkutánne; TAA, antigén spojený s nádorom.
2. ^* Vyvinutý spoločnosťou CureVac AG.

PowerPointová snímka

DC mRNA vakcíny proti rakovine

Keďže DC sú ústrednými hráčmi pri iniciovaní antigén-špecifických imunitných reakcií, zdalo sa logické využiť ich na imunoterapiu rakoviny. Prvý dôkaz, že DC elektroporované s mRNA by mohli vyvolať silné imunitné reakcie proti nádorovým antigénom, opísali Boczkowski a kolegovia v roku 1996 (odkaz 124 ). V tejto štúdii DC pulzované s mRNA kódujúcou ovalbumín (OVA) alebo RNA odvodenými od nádoru vyvolali imunitnú odpoveď redukujúcu nádor v modeloch exprimujúcich OVA a iných melanómových modeloch u myší. Boli identifikované rôzne imunitné regulačné proteíny vo forme adjuvancií kódovaných mRNA, ktoré môžu zvýšiť účinnosť vakcín proti rakovine DC. Niekoľko štúdií preukázalo, že elektroporácia DC s mRNA kódujúcou kostimulačné molekuly, ako je CD83, člen superrodiny receptora tumor nekrotizujúceho faktora 4 (TNFRSF4; tiež známy ako OX40) a ligand 4-1BB (4-1BBL) viedla ^{k podstatnému zvýšeniu imunostimulačnej aktivity DC125,1127,126,126 ,. Funkcie DC môžu byť modulované aj} použitím prozápalových cytokínov kódovaných mRNA, ako je IL-12, alebo molekúl spojených s ^{transportom129,130,131 .} Ako je uvedené vyššie, TriMix je zmes adjuvancií kódovaných mRNA (CD70, CD40L a konštitutívne aktívny TLR4), ktoré možno elektroporovať v kombinácii s mRNA alebo mRNA kódujúcou ^antigén132 . Táto formulácia sa ukázala ako účinná vo viacerých predklinických štúdiách zvýšením aktivácie DC a posunutím fenotypu CD4 ⁺ T buniek z T regulačných buniek na bunky podobné T pomocným 1 ( _{TH1 )} ^{132 , 133 , 134 , 135 , 136} . Je pozoruhodné, že imunizácia pacientov s melanómom štádia III alebo štádia IV pomocou DC naplnených mRNA kódujúcou antigény spojené s melanómom a adjuvans TriMix viedla k regresii nádoru u 27 % liečených ^jedincov137 . Teraz sa uskutočnilo viacero klinických štúdií s DC vakcínami zameranými na rôzne typy rakoviny, ako je metastatická rakovina prostaty, metastatická rakovina pľúc, karcinóm obličkových buniek, rakovina mozgu, melanóm, akútna myeloidná leukémia, rakovina pankreasu a iné ^138 , 139 (prehľad v odkazoch 51 , 58 ).

Nová línia výskumu kombinuje elektroporáciu mRNA DC s tradičnými chemoterapeutickými činidlami alebo inhibítormi imunitných kontrolných bodov. V jednej štúdii boli pacienti s melanómom štádia III alebo IV liečení ipilimumabom, monoklonálnou protilátkou proti CTL antigénu 4 (CTLA4), a DC naplnené mRNA kódujúcou antigény spojené s melanómom plus TriMix. Táto intervencia viedla k trvalému zníženiu nádoru u časti jedincov s rekurentným alebo refraktérnym ^{melanómom140} .

Priama injekcia vakcín proti rakovine mRNA

Spôsob podávania a formát podávania mRNA vakcín môže výrazne ovplyvniť výsledky. Boli vyvinuté rôzne formáty vakcín proti rakovine mRNA s použitím bežných spôsobov podávania (intradermálne, intramuskulárne, subkutánne alebo intranazálne) a niektorých nekonvenčných spôsobov vakcinácie (intranodálne, intravenózne, intrasplenické alebo intratumorálne).

Intranodálne podanie nahej mRNA je nekonvenčný, ale účinný spôsob podania vakcíny. Priama injekcia mRNA do sekundárneho lymfoidného tkaniva ponúka výhodu cieleného dodania antigénu do buniek prezentujúcich antigén v mieste aktivácie T buniek, čím sa eliminuje potreba migrácie DC. Niekoľko štúdií preukázalo ^, že intranodálne injikovaná holá mRNA môže byť selektívne prijímaná DC a môže vyvolať silné profylaktické alebo terapeutické protinádorové T bunkové ^{reakcie62,66 ;} skorá štúdia tiež preukázala podobné zistenia s intrasplenickým ^podaním141 . V niektorých prípadoch sa ukázalo ^, že spoločné podávanie DC-aktivujúceho proteínu FMS-príbuzného ligandu tyrozínkinázy 3 (FLT3L) ďalej zlepšuje imunitné reakcie na intranodálnu mRNA ^{vakcináciu142,143} . Začlenenie adjuvans TriMix do intranodálnych injekcií myšiam s mRNA kódujúcou antigény spojené s nádorom viedlo k silným antigénovo špecifickým CTL reakciám a kontrole nádoru vo viacerých modeloch ^nádorov133 . Nedávnejšia štúdia preukázala, že intranodálna injekcia mRNA kódujúcej proteín E7 ľudského papilomavírusu (HPV) 16 pomocou TriMix zvýšila počet CD8 ⁺ T buniek infiltrujúcich nádor a inhibovala rast modelu nádoru exprimujúceho E7 u ^myší67 .

Úspech predklinických štúdií viedol k začatiu klinických štúdií s použitím intranodálne injikovanej holej mRNA kódujúcej antigény súvisiace s nádorom pacientom s pokročilým melanómom (NCT01684241) a pacientom s hepatocelulárnym karcinómom (EudraCT: 2012-005572-34). V jednej publikovanej štúdii boli pacienti s metastatickým melanómom liečení intranodálne podávanými DC elektroporovanými s mRNA kódujúcou s melanómom asociované antigény tyrozinázu alebo gp100 a TriMix, ktoré indukovali obmedzené protinádorové reakcie144 ^.

Intranazálne podávanie vakcíny je bezihlový, neinvazívny spôsob podávania, ktorý umožňuje rýchly príjem antigénu DC. Intranazálne podaná mRNA v komplexe s LNP Stemfect (Stemgent) viedla k oneskorenému nástupu nádoru a zvýšenému prežitiu v profylaktických a terapeutických modeloch myších nádorov s použitím OVA-exprimujúcej E.G7-OVA T lymfoblastickej bunkovej ^línie145 .

Intratumorálna vakcinácia mRNA je užitočný prístup, ktorý ponúka výhodu rýchlej a špecifickej aktivácie T buniek rezidentných v nádore. Tieto vakcíny často nezavádzajú mRNA kódujúce antigény spojené s nádorom, ale jednoducho sa zameriavajú na aktiváciu nádorovo špecifickej imunity in situ pomocou imunostimulačných molekúl. Skorá štúdia preukázala, že holá mRNA alebo protamínom stabilizovaná mRNA kódujúca gén nesúvisiaci s nádorom ( GLB1 ) zhoršovala rast nádoru a poskytovala ochranu na myšom modeli s glioblastómom, pričom využívala výhody vnútorných imunogénnych vlastností ^mRNA146 . Novšia štúdia ukázala, že intratumorálne podanie mRNA kódujúcej upravený cytokín založený na interferóne-β (IFNβ) fúzovanom s antagonistom transformujúceho rastového faktora β (TGFβ) zvýšilo cytolytickú kapacitu CD8 ⁺ T buniek a mierne oddialilo rast nádoru u myších modelov s lymfómom alebo karcinómom pľúc exprimujúcim OVA ¹⁴⁷ . Ukázalo sa tiež, že intratumorálne podanie TriMix mRNA, ktorá nekóduje antigény spojené s nádorom, vedie k aktivácii CD8α ⁺ DC a nádorovo špecifických T buniek, čo vedie k oneskorenému rastu nádoru u rôznych myších ^modelov148 .

Systémové podávanie mRNA vakcín nie je bežné kvôli obavám z agregácie so sérovými proteínmi a rýchlej extracelulárnej degradácie mRNA; preto je nevyhnutné formulovať mRNA do nosných molekúl. Ako bolo diskutované vyššie, boli vyvinuté mnohé aplikačné formulácie na uľahčenie príjmu mRNA, zvýšenie proteínovej translácie a ochranu mRNA pred RNázami ^{10 , 11 , 79 , 80} . Ďalšou dôležitou otázkou je biodistribúcia mRNA vakcín po systémovom podaní. Určité katiónové komplexotvorné činidlá na báze LNP sa dodávajú intravenózne hlavne do pečene ²¹ , čo nemusí byť ideálne na aktiváciu DC. Nedávno bola opísaná účinná stratégia DC cielenia mRNA vakcín po systémovom podaní59 ^. Platforma na dodávanie mRNA-lipoplexu (komplex mRNA-lipozóm) bola vytvorená pomocou katiónových lipidov a neutrálnych pomocných lipidov formulovaných s mRNA a zistilo sa, že pomer lipidov k mRNA, a teda aj čistý náboj častíc, má zásadný vplyv na biodistribúciu vakcíny. Zatiaľ čo kladne nabitá lipidová častica sa primárne zameriavala na pľúca, záporne nabitá častica sa zameriavala na DC v sekundárnych lymfoidných tkanivách a kostnej dreni. Záporne nabité častice vyvolali silné imunitné reakcie proti nádorovo špecifickým antigénom, ktoré boli spojené s pôsobivou redukciou nádoru na rôznych myších ^modeloch59 . Keďže sa u myší alebo primátov (okrem človeka) nepozorovali žiadne toxické účinky, začali sa klinické štúdie využívajúce tento prístup na liečbu pacientov s pokročilým melanómom alebo trojnásobne negatívnym karcinómom prsníka (NCT02410733 a NCT02316457).

Rôzne bunky prezentujúce antigén sa nachádzajú v koži ¹⁴⁹ , čo z nej robí ideálne miesto na dodávanie imunogénu počas vakcinácie ( obr. 3 ). Intradermálny spôsob podávania bol teda široko používaný pre vakcíny proti rakovine mRNA. Skorá semenná štúdia preukázala, že intradermálne podanie celkovej nádorovej RNA oneskorilo rast nádoru na myšom modeli s ^{fibrosarkómom65} . Intradermálna injekcia mRNA kódujúcej nádorové antigény v platforme RNActive na báze protamínu sa ukázala ako účinná v rôznych myších modeloch rakoviny36 ^a vo viacerých profylaktických a terapeutických klinických nastaveniach ( tabuľka 3 ). Jedna takáto štúdia preukázala, že mRNA kódujúce survivín a rôzne antigény melanómového nádoru viedli k zvýšenému počtu antigén-špecifických T buniek v podskupine pacientov s ^{melanómom150} . U ľudí s rakovinou prostaty rezistentnou na kastráciu vyvolala vakcína RNActive exprimujúca viaceré proteíny súvisiace s rakovinou prostaty u väčšiny príjemcov antigén-špecifické reakcie T- ^buniek151 . Nosiče na báze lipidov tiež prispeli k účinnosti intradermálne podávaných vakcín proti rakovine mRNA. Dodanie OVA-kódujúcej mRNA do DOTAP a/alebo DOPE lipozómov viedlo k antigén-špecifickej CTL aktivite a inhibovalo rast OVA-exprimujúcich nádorov u ^myší152 . V tej istej štúdii zlepšilo spoločné podávanie mRNA kódujúcej faktor stimulujúci kolónie granulocytov a makrofágov (GM-CSF) cytolytické reakcie špecifické pre OVA. Ďalšia správa ukázala, že subkutánne dodanie mRNA formulovanej s LNP kódujúcej dva antigény spojené s melanómom oneskorilo rast nádoru u myší a spoločné dodanie lipopolysacharidu (LPS) v LNP zvýšilo tak CTL, ako aj protinádorovú ^aktivitu153 . Vo všeobecnosti sa vakcíny proti rakovine mRNA ukázali ako imunogénne u ľudí, ale na dosiahnutie väčších klinických prínosov bude pravdepodobne potrebné ďalšie zdokonaľovanie metód očkovania, ako vyplýva zo základného imunologického výskumu.

V prípade injikovanej mRNA vakcíny medzi hlavné faktory účinnosti patria nasledovné: úroveň expresie antigénu v profesionálnych bunkách prezentujúcich antigén (APC), ktorá je ovplyvnená účinnosťou nosiča, prítomnosťou patogénov spojených molekulárnych vzorcov (PAMP) vo forme dvojvláknovej RNA (dsRNA) alebo nemodifikovaných nukleozidov a úrovňou optimalizácie obsahu G5′-kodonu a obsahu G5′-kodonu. 3′ nepreložené oblasti (UTR) atď.); dozrievanie dendritických buniek (DC) a migrácia do sekundárneho lymfoidného tkaniva, ktorá je zvýšená PAMP; a schopnosť vakcíny aktivovať robustné reakcie B buniek pomocných T folikulárnych buniek (T _FH ) a germinálnych centier (GC) – oblasť, ktorá je stále málo pochopená. Ako príklad je uvedená intradermálna injekcia. EC, extracelulárny.

PowerPointová snímka Obrázok v plnej veľkosti

Kombinácia vakcinácie mRNA s prídavnými terapiami, ako je tradičná chemoterapia, rádioterapia a inhibítory imunitných kontrolných bodov, zvýšila v niektorých predklinických štúdiách ^154 , 155 priaznivý výsledok očkovania . Napríklad liečba cisplatinou významne zvýšila terapeutický účinok imunizácie mRNA kódujúcou HPV16 E7 onkoproteín a TriMix, čo viedlo k úplnému odmietnutiu nádorov ženského pohlavného traktu u myšacieho ^modelu67 . Predovšetkým sa tiež navrhlo , že liečba protilátkami proti proteínu programovanej bunkovej smrti 1 (PD1) zvýšila účinnosť vakcíny na báze neoepitopovej mRNA proti metastatickému melanómu u ľudí, ale na preskúmanie tejto hypotézy je potrebných viac údajov68 ^.

Terapeutické úvahy a výzvy Správna výrobná prax výroby

mRNA sa vyrába in vitro reakciami s rekombinantnými enzýmami, ribonukleotidtrifosfátmi (NTP) a templátom DNA; je teda rýchla a relatívne jednoduchá na výrobu v porovnaní s tradičnými platformami na produkciu proteínových podjednotiek a živých alebo inaktivovaných vírusových vakcín. Jeho reakčný výťažok a jednoduchosť umožňujú rýchlu produkciu mRNA v malom zariadení GMP. Výrobný proces je nezávislý od sekvencie a je primárne určený dĺžkou RNA, nukleotidom a chémiou uzáveru a čistením produktu; je však možné, že určité sekvenčné vlastnosti, ako je extrémna dĺžka, môžu predstavovať ťažkosti (DW, nepublikované pozorovania). Podľa súčasných skúseností môže byť proces štandardizovaný tak, aby produkoval takmer akýkoľvek kódovaný proteínový imunogén, čo ho robí obzvlášť vhodným pre rýchlu reakciu na vznikajúce infekčné choroby.

Všetky enzýmy a reakčné zložky potrebné na GMP produkciu mRNA možno získať od komerčných dodávateľov ako syntetizované chemikálie alebo bakteriálne exprimované činidlá bez živočíšnych zložiek, čím sa vyhnete bezpečnostným problémom súvisiacim s náhodnými látkami, ktoré trápia výrobu vakcín na báze bunkovej kultúry. Všetky zložky, ako je plazmidová DNA, fágové polymerázy, uzatváracie enzýmy a NTP, sú ľahko dostupné ako sledovateľné zložky GMP; niektoré z nich sú však v súčasnosti dostupné len v obmedzenom rozsahu alebo za vysoké náklady. Keď sa terapeutiká mRNA posúvajú smerom ku komercializácii a zvyšuje sa rozsah výroby, pre zdrojové materiály GMP sa môžu stať dostupnejšie ekonomickejšie možnosti.

GMP produkcia mRNA začína produkciou templátu DNA, po ktorej nasleduje enzymatická IVT a postupuje podľa rovnakého viackrokového protokolu, ktorý sa používa na syntézu vo výskumnom rozsahu, s pridanými kontrolami na zaistenie bezpečnosti a účinnosti produktu ¹⁶ . V závislosti od konkrétneho mRNA konštruktu a chémie môže byť protokol mierne upravený oproti tomu, čo je tu opísané, aby sa prispôsobili modifikovaným nukleozidom, stratégiám uzatvárania alebo odstráneniu templátu. Na začatie procesu produkcie sa templátová plazmidová DNA produkovaná v Escherichia coli linearizuje použitím reštrikčného enzýmu, aby sa umožnila syntéza odtokových transkriptov s poly(A) traktom na 3′ konci. Ďalej sa mRNA syntetizuje z NTP pomocou DNA-dependentnej RNA polymerázy z bakteriofága (ako je T7, SP6 alebo T3). Templátová DNA sa potom degraduje inkubáciou s DNázou. Nakoniec je mRNA enzymaticky alebo chemicky uzavretá, aby sa umožnila účinná translácia in vivo . Syntéza mRNA je vysoko produktívna a poskytuje viac ako 2 gl ^-1 mRNA plnej dĺžky v reakciách v multigramovom meradle za optimalizovaných podmienok.

Akonáhle je mRNA syntetizovaná, je spracovaná niekoľkými purifikačnými krokmi, aby sa odstránili reakčné zložky, vrátane enzýmov, voľných nukleotidov, zvyškovej DNA a skrátených fragmentov RNA. Zatiaľ čo precipitácia LiCl sa bežne používa na prípravu v laboratórnom meradle, purifikácia v klinickom meradle využíva derivatizované mikroguľôčky v dávkových alebo stĺpcových formátoch, ktoré sa ^ľahšie používajú vo ^{veľkom meradle156,157} . Pre niektoré platformy mRNA je odstránenie dsRNA a iných kontaminantov rozhodujúce pre účinnosť konečného produktu, pretože je to silný induktor inhibície translácie závislej od interferónu. To sa dosiahlo FPLC s reverznou fázou v laboratórnom meradle ¹⁵⁸ a skúmajú sa prístupy škálovateľného vodného čistenia. Potom, čo je mRNA purifikovaná, je vymenená do konečného skladovacieho pufra a sterilne filtrovaná na následné plnenie do liekoviek na klinické použitie. RNA je náchylná na degradáciu enzymatickými aj chemickými cestami157 ^. Formulačné pufre sa testujú, aby sa zaistilo, že neobsahujú kontaminujúce RNázy a môžu obsahovať zložky pufrov, ako sú antioxidanty a chelátory, ktoré minimalizujú účinky reaktívnych foriem kyslíka a dvojmocných kovových iónov, ktoré vedú k nestabilite ^mRNA159 .

Farmaceutická formulácia mRNA je aktívnou oblasťou vývoja. Hoci väčšina produktov pre štúdie v ranej fáze sa skladuje zmrazená (-70 °C), snahy o vývoj formulácií, ktoré sú stabilné pri vyšších teplotách vhodnejších na distribúciu vakcín, pokračujú. Publikované správy naznačujú, že možno pripraviť stabilné formulácie v chlade alebo pri izbovej teplote. Uvádza sa, že platforma RNActive je aktívna po lyofilizácii a skladovaní pri 5–25 °C počas 3 rokov a pri 40 °C počas 6 ^mesiacov91 . Iná správa preukázala , že lyofilizovaná nahá mRNA je stabilná aspoň 10 mesiacov v chladených podmienkach160 ^. Stabilita produktov mRNA sa môže zlepšiť aj balením do nanočastíc alebo spoločnou formuláciou s inhibítormi ^RNázy161 . Pre mRNA zapuzdrenú v lipidoch bola pozorovaná najmenej 6 mesačná stabilita (Arbutus Biopharma, osobná komunikácia), ale dlhodobé skladovanie takýchto komplexov mRNA-lipid v nezmrazenej forme ešte nebolo hlásené.

Regulačné aspekty

Neexistujú žiadne špecifické usmernenia od FDA alebo Európskej liekovej agentúry (EMA) pre produkty vakcíny mRNA. Rastúci počet klinických skúšok vykonaných pod dohľadom EMA a FDA však naznačuje, že regulačné orgány akceptovali prístupy navrhované rôznymi organizáciami, aby preukázali, že produkty sú bezpečné a prijateľné na testovanie na ľuďoch. Pretože mRNA spadá do širokej vakcínovej kategórie genetických imunogénov, mnohé z hlavných princípov, ktoré boli definované pre DNA vakcíny ¹⁶² a vektory génovej terapie ^163 , 164, možno pravdepodobne aplikovať na mRNA s určitými úpravami, aby odrážali jedinečné vlastnosti mRNA. Podrobný prehľad predpisov EMA pre RNA vakcíny od Hinza a kolegov zdôrazňuje rôzne regulačné cesty stanovené pre profylaktické infekčné choroby oproti terapeutickým ^{aplikáciám165} . Bez ohľadu na špecifickú klasifikáciu v rámci existujúcich usmernení možno niektoré témy pozorovať v tom, čo je uvedené v týchto usmerneniach a v tom, čo bolo oznámené pre nedávno publikované klinické štúdie. Najmä nedávna správa o mRNA vakcíne proti vírusu chrípky vyzdvihuje predklinické a klinické údaje preukazujúce biodistribúciu a perzistenciu u myší, ochranu pred chorobou v príslušnom zvieracom modeli (fretky) a imunogenicitu, lokálnu reaktogenitu a toxicitu u ^ľudí22 . Keďže produkty mRNA sa stávajú čoraz významnejšími v oblasti vakcín, je pravdepodobné, že sa vyvinú špecifické usmernenia, ktoré vymedzia požiadavky na výrobu a hodnotenie nových vakcín mRNA. Schválené v EP – tu čítaj

Bezpečnosť

Požiadavka na bezpečnosť moderných profylaktických vakcín je mimoriadne prísna, pretože vakcíny sa podávajú zdravým jedincom. Pretože proces výroby mRNA nevyžaduje toxické chemikálie alebo bunkové kultúry, ktoré by mohli byť kontaminované náhodnými vírusmi, produkcia mRNA sa vyhýba bežným rizikám spojeným s inými očkovacími platformami, vrátane živých vírusov, vírusových vektorov, inaktivovaných vírusov a podjednotkových proteínových vakcín. Okrem toho krátky čas výroby mRNA predstavuje málo príležitostí na zavedenie kontaminujúcich mikroorganizmov. U očkovaných ľudí sa teoretické riziká infekcie alebo integrácie vektora do DNA hostiteľskej bunky netýkajú mRNA. Z vyššie uvedených dôvodov sa mRNA vakcíny považovali za relatívne bezpečný formát vakcíny.

Teraz bolo testovaných niekoľko rôznych mRNA vakcín od fázy I do IIb klinických štúdií a ukázalo sa, že sú bezpečné a primerane dobre tolerované ( tabuľky 2 , 3 ). Nedávne štúdie na ľuďoch ^však preukázali mierne a v zriedkavých prípadoch závažné reakcie v mieste vpichu alebo systémové reakcie pre rôzne ^{platformy mRNA22,91} . Potenciálne obavy týkajúce sa bezpečnosti, ktoré sa pravdepodobne vyhodnotia v budúcich predklinických a klinických štúdiách, zahŕňajú lokálny a systémový zápal, biodistribúciu a perzistenciu exprimovaného imunogénu, stimuláciu auto-reaktívnych protilátok a potenciálne toxické účinky akýchkoľvek nepôvodných nukleotidov a komponentov dodávacieho systému. Možnou obavou by mohlo byť, že niektoré očkovacie platformy na báze mRNA54,166 ^{indukujú silné} reakcie interferónu typu I, ktoré sú spojené nielen so zápalom, ale ^{potenciálne aj s autoimunitou167,168} . Identifikácia jedincov so zvýšeným rizikom autoimunitných reakcií pred očkovaním mRNA teda môže umožniť prijatie primeraných opatrení. Ďalší potenciálny bezpečnostný problém by mohol vyplývať z prítomnosti extracelulárnej RNA počas vakcinácie mRNA. Ukázalo sa, že extracelulárna holá RNA zvyšuje permeabilitu tesne zbalených endotelových buniek a môže tak prispievať k ^edému169 . Ďalšia štúdia ukázala, že extracelulárna RNA podporuje zrážanlivosť krvi a patologickú tvorbu ^trombu170 . Bezpečnosť si preto bude vyžadovať nepretržité hodnotenie, pretože rôzne modality mRNA a systémy podávania sa používajú po prvýkrát u ľudí a testujú sa na väčších populáciách pacientov.

Závery a budúce smerovanie

V súčasnosti mRNA vakcíny zažívajú prudký nárast v základnom a klinickom výskume. Len za posledné 2 roky sme boli svedkami publikovania desiatok predklinických a klinických správ preukazujúcich účinnosť týchto platforiem. Zatiaľ čo väčšina skorých prác v oblasti mRNA vakcín sa zamerala na aplikácie proti rakovine, množstvo nedávnych správ preukázalo silu a všestrannosť mRNA na ochranu pred širokou škálou infekčných patogénov, vrátane vírusu chrípky, vírusu Ebola, vírusu Zika, Streptococcus spp. a T. gondii ( tabuľky 1 , 2 ).

Zatiaľ čo predklinické štúdie priniesli veľký optimizmus, pokiaľ ide o vyhliadky a výhody vakcín na báze mRNA, dve nedávne klinické správy viedli k miernejším očakávaniam ^22 , 91 . V oboch štúdiách bola imunogenicita u ľudí miernejšia, ako sa očakávalo na zvieracích modeloch, čo je fenomén pozorovaný aj pri vakcínach na báze DNA171 ^a vedľajšie účinky neboli triviálne. Upozorňujeme, že tieto štúdie predstavujú iba dve variácie platforiem vakcín mRNA a pri zmene expresných a imunostimulačných profilov vakcíny môžu existovať podstatné rozdiely. Je potrebný ďalší výskum, aby sa zistilo, ako rôzne živočíšne druhy reagujú na zložky vakcíny mRNA a zápalové signály a ktoré dráhy imunitnej signalizácie sú u ľudí najúčinnejšie.

Nedávne pokroky v porozumení a redukcii vrodeného imunitného snímania mRNA pomohli úsiliu nielen pri aktívnej vakcinácii, ale aj v niekoľkých aplikáciách pasívnej imunizácie alebo pasívnej imunoterapie pri infekčných chorobách a rakovine ( rámček 4 ). Priame porovnania medzi platformami expresie mRNA by mali objasniť, ktoré systémy sú najvhodnejšie pre pasívnu aj aktívnu imunizáciu. Vzhľadom na veľký počet sľubných platforiem mRNA by ďalšie priame porovnania boli pre oblasť vakcín nanajvýš cenné, pretože by to výskumníkom umožnilo zamerať zdroje na tie, ktoré sa najlepšie hodia pre každú aplikáciu.

Rýchle tempo pokroku vo vakcínach mRNA by nebolo možné bez veľkých nedávnych pokrokov v oblasti vrodeného imunitného snímania RNA a metód dodávania in vivo . Rozsiahly základný výskum v oblasti RNA a biochémie lipidov a polymérov umožnil previesť mRNA vakcíny do klinických skúšok a viedol k úžasnej úrovni investícií do spoločností zaoberajúcich sa mRNA vakcínami ( tabuľka 4 ). Moderna Therapeutics, založená v roku 2010, získala takmer 2 miliardy USD kapitálu s plánom na komercializáciu vakcín a terapií na báze mRNA ^172 , 173 . Americký úrad pre biomedicínsky pokročilý výskum a vývoj (BARDA) sa zaviazal podporiť klinické hodnotenie spoločnosti Moderna sľubnej nukleozidmi modifikovanej mRNA vakcíny pre vírus Zika (NCT03014089). V Nemecku má CureVac AG rozširujúce sa portfólio terapeutických cieľov ¹⁷⁴ vrátane rakoviny a infekčných chorôb a BioNTech vyvíja inovatívny prístup k personalizovanej medicíne rakoviny pomocou mRNA vakcín ¹²¹ ( rámček 2 ). Premena základného výskumu do klinického testovania je tiež výhodnejšia vďaka komercializácii vlastných GMP produktov spoločnosťami ako New England Biolabs a Aldevron ¹⁷⁵ . Napokon, nedávne spustenie Koalície pre inovácie v pripravenosti na epidémiu (CEPI) poskytuje veľký optimizmus pre budúce reakcie na vznikajúce vírusové epidémie. Cieľom tohto nadnárodného verejného a súkromného partnerstva je získať 1 miliardu dolárov na vývoj vakcín založených na platforme, ako je napríklad mRNA, aby sa rýchlo obmedzili vznikajúce epidémie skôr, ako sa vymknú spod kontroly.

Tabuľka 4 Poprední vývojári vakcín mRNA: zameranie výskumu, partneri a terapeutické platformy

Inštitúcia	technológia mRNA	Partneri	Indikácia (cieľ choroby)
Biotechnológia Argos	mRNA neoantigény (platforma Arcelis)	NA	Individualizované vakcíny proti rakovine, HIV-1
BioNTech RNA Pharmaceuticals GmbH	Nukleozidmi modifikovaná mRNA (IVAC Mutanóm, FixVAC)	Genentech/Roche	Individualizované vakcíny proti rakovine
		Bayer AG	Veterinárne vakcíny
CureVac AG	Sekvenčne optimalizovaná, purifikovaná mRNA (RNActive, RNArt, RNAdjuvant)	Boehringer Ingelheim GmbH	Vakcíny proti rakovine (rakovina pľúc)
		Johnson & Johnson	Vírusové vakcíny
		Sanofi Pasteur	Vakcíny proti infekčným chorobám
		BMGF	Vakcíny proti infekčným chorobám
		IAVI	vakcíny proti HIV
Imunoterapie eTheRNA	Purifikovaná mRNA (TriMix)	NA	Rakovina (melanóm, prsník), vírusové vakcíny (HBV a/alebo HPV)
GlaxoSmithKline/Novartis	Samozosilňujúca sa mRNA (SAM) (replikón alfavírusu)	NA	Vakcíny proti infekčným chorobám
Moderná terapia	Nukleozidmi modifikovaná mRNA	Spoločnosť Merck & Co.	Individualizované vakcíny proti rakovine, vírusové vakcíny
		BMGF, DARPA, BARDA	Vírusové vakcíny (vírus chrípky, CMV, HMPV, PIV, vírus chikungunya, vírus Zika)
University of Pennsylvania	Nukleozidmi modifikovaná purifikovaná mRNA	NA	Vakcíny proti infekčným chorobám

1. BARDA, Biomedical Advanced Research and Development Authority; BMGF, Nadácia Billa a Melindy Gatesových; CMV, cytomegalovírus; DARPA, Agentúra pre pokročilé obranné výskumné projekty; HBV, vírus hepatitídy B; HMPV, ľudský metapneumovírus; HPV, ľudský papilomavírus; IAVI, International AIDS Vaccine Initiative; NA, nie je k dispozícii; PIV, vírus parainfluenzy.

PowerPointová snímka

udúcnosť mRNA vakcín je preto mimoriadne jasná a klinické údaje a zdroje poskytnuté týmito spoločnosťami a inými inštitúciami budú pravdepodobne podstatne stavať na základnom výskume terapeutík založených na mRNA a oživiť ho.

Rámček 4: Pasívna imunoterapia založená na mRNA

Rekombinantné monoklonálne protilátky rýchlo transformujú farmaceutický trh a stali sa jednou z najúspešnejších terapeutických tried na liečbu autoimunitných porúch, infekčných chorôb, osteoporózy, hypercholesterolémie a rakoviny ^{188 , 189 , 190 , 191 , 192.} Vysoké náklady na výrobu proteínov a potreba častého systémového podávania však predstavujú hlavné obmedzenie ich širokej dostupnosti. Technológie prenosu protilátok a génov by mohli tieto ťažkosti potenciálne prekonať, pretože pacientom podávajú nukleotidové sekvencie kódujúce monoklonálne protilátky, čo umožňuje in vivo produkciu správne poskladaných a modifikovaných proteínových terapeutík ^193. Boli skúmané viaceré vektory génovej terapie (napríklad vírusové vektory a plazmidová DNA), ktoré majú obmedzenia, ako je preexistujúca imunita hostiteľa, získaná imunita proti vektoru, vysoká vrodená imunogenicita, ťažkosti s reguláciou produkcie protilátok in vivo a toxické účinky ^193 , 194. mRNA terapeutiká kombinujú bezpečnosť s vynikajúcou kontrolou dávky a potenciálom pre viacnásobné podávanie bez preexistujúcej alebo imunity proti vektoru. Dve skoré správy preukázali, že dendritické bunky (DC) elektroporované mRNA kódujúcimi protilátky proti imunoinhibičným proteínom vylučovali funkčné protilátky a zlepšili imunitné odpovede u myší ^195 , 196. Tri nedávne publikácie opisujú použitie injekčnej mRNA na in vivo produkciu terapeutických protilátok: Pardi a kolegovia preukázali, že jednorazová intravenózna injekcia myšiam s mRNA modifikovanými nukleozidmi, enkapsulovanými lipidovými nanočasticami (LNP), kódujúcimi ťažké a ľahké reťazce protilátky VRC01 neutralizujúcej HIV-1, rýchlo produkovala vysoké hladiny funkčných protilátok v sére a chránila humanizované myši pred infekciou HIV-1 ¹⁹⁷ ; Stadler a kolegovia preukázali, že intravenózne podanie nízkych dávok mRNA modifikovaných nukleozidmi v komplexe s TransIT (Mirus Bio LLC) kódujúcich rôzne bispecifické protilátky proti rakovine viedlo k eliminácii veľkých nádorov v myšacích modeloch ¹⁹⁸ ; a Thran a kolegovia ¹⁹⁹ použili nemodifikovaný systém podávania mRNA-LNP ¹²na expresiu troch monoklonálnych protilátok v hladinách, ktoré chránia pred letálnym napadnutím vírusom besnoty, botulotoxínom a bunkovou líniou B bunkového lymfómu. V žiadnej z týchto štúdií neboli pozorované žiadne toxické účinky. Tieto pozorovania naznačujú, že mRNA ponúka bezpečnú, jednoduchú a účinnú alternatívu k podávaniu terapeutického proteínu monoklonálnej protilátky s potenciálnou aplikáciou na akýkoľvek terapeutický proteín.

Poznámka vydavateľa

Springer Nature zostáva neutrálny, pokiaľ ide o jurisdikčné nároky v publikovaných mapách a inštitucionálnych afiliáciách.

Referencie

1. Svetová zdravotnícka organizácia. Imunizačné pokrytie. Svetová zdravotnícka organizácia http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs378/en (2017) ten je vždy rovnaký aj dnes. https://www.cdc.gov/mmwr/volumes/67/wr/mm6745a2.htm?s_cid=mm6745a2_w , https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/345954/WHO-EURO-2018-3364-43123-60366-eng.pdf?sequence=1&isAllowed=y , Global vaccine action plan A70/25/delegácia za SR A70/DIV./1 Rev.1
   
2. Younger, DS, Younger, AP & Guttmacher, S. Očkovanie detí: dôsledky pre globálne a domáce verejné zdravie. Neurol. Clin. 34 , 1035-1047 (2016).Článok PubMed Študovňa Google 
3. Plotkin, SA Vakcíny: štvrté storočie. Clin. Vaccine Immunol. 16 , 1709-1719 (2009).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
4. Rodrigues, CMC, Pinto, MV, Sadarangani, M. & Plotkin, SA Kde sú vakcíny? J. Infect. 74 (Suppl. 1), S2–S9 (2017).Článok PubMed PubMed Central Študovňa Google 
5. Wolff, JA a kol. Priamy prenos génov do svalu myši in vivo . Science 247 , 1465-1468 (1990). Táto štúdia demonštruje produkciu proteínu z RNA podávanej in vivo .Článok CAS PubMed Študovňa Google 
6. Jirikowski, GF, Sanna, PP, Maciejewski-Lenoir, D. & Bloom, FE Zvrat diabetes insipidus u potkanov Brattleboro: intrahypotalamická injekcia vazopresínovej mRNA. Science 255 , 996-998 (1992).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
7. Suschak, JJ, Williams, JA & Schmaljohn, CS Pokroky v DNA vakcínových vektoroch, nemechanické spôsoby podávania a molekulárne adjuvans na zvýšenie imunogenicity. Hum. Vaccin. Imunother. 13 , 2837-2848 (2017).Článok PubMed Central PubMed Študovňa Google 
8. Tandrup Schmidt, S., Foged, C., Korsholm, KS, Rades, T. & Christensen, D. Adjuvans na báze lipozómov pre podjednotkové vakcíny: stratégie formulácie pre podjednotkové antigény a imunostimulátory. Pharmaceutics 8 , E7 (2016).Článok PubMed CAS Študovňa Google 
9. Kariko, K. a kol. Inkorporácia pseudouridínu do mRNA poskytuje vynikajúci neimunogénny vektor so zvýšenou translačnou kapacitou a biologickou stabilitou. Mol. Ther. 16 , 1833-1840 (2008).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
10. Kauffman, KJ, Webber, MJ & Anderson, DG Materiály na nevírusové intracelulárne dodávanie liečiv mediátorovej RNA. J. Control. Vydanie 240 , 227–234 (2016).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
11. Guan, S. & Rosenecker, J. Nanotechnológie v dodávaní mRNA terapeutík pomocou nevírusových vektorových systémov dodávania. Gene Ther. 24 , 133-143 (2017).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
12. Thess, A. a kol. Sekvenčne vytvorená mRNA bez chemických nukleozidových modifikácií umožňuje účinnú proteínovú terapiu u veľkých zvierat. Mol. Ther. 23 , 1456-1464 (2015).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
13. Kariko, K., Muramatsu, H., Ludwig, J. & Weissman, D. Generovanie optimálnej mRNA pre terapiu: HPLC purifikácia eliminuje imunitnú aktiváciu a zlepšuje transláciu nukleozidmi modifikovanej mRNA kódujúcej proteín. Nucleic Acids Res. 39 , e142 (2011). Táto štúdia demonštruje dôležitosť purifikácie IVT mRNA pri dosahovaní silnej proteínovej translácie a pri potláčaní zápalových reakcií.Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
14. Weissman, D. mRNA transkriptová terapia. Expert Rev. Vaccines 14 , 265-281 (2015).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
15. Sahin, U., Kariko, K. & Tureci, O. Terapeutiká na báze mRNA – vývoj novej triedy liekov. Nat. Drug Discov. 13 , 759-780 (2014). Toto je užitočný prehľad pokrývajúci vakcínové a nevakcinačné formy mRNA terapeutík.Článok CAS PubMed Študovňa Google 
16. Pardi, N., Muramatsu, H., Weissman, D. & Kariko, K. In vitro transkripcia dlhej RNA obsahujúcej modifikované nukleozidy. Metódy Mol. Biol. 969 , 29-42 (2013).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
17. Tsui, NB, Ng, EK & Lo, YM Stabilita endogénnej a pridanej RNA v krvných vzorkách, sére a plazme. Clin. Chem. 48 , 1647-1653 (2002).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
18. Petsch, B. a kol. Ochranná účinnosť in vitro syntetizovaných špecifických mRNA vakcín proti infekcii vírusom chrípky A. Nat. Biotechnol. 30 , 1210-1216 (2012). Táto štúdia ukazuje, že priamo injikovaná nereplikujúca sa mRNA môže vyvolať ochranné imunitné reakcie proti infekčnému patogénu.Článok CAS PubMed Študovňa Google 
19. Geall, AJ a kol. Nevírusové dodávanie samoamplifikačných RNA vakcín. Proc. Natl Acad. Sci. USA 109 , 14604 – 14609 (2012). Táto dôležitá štúdia ukazuje, že trvanie produkcie proteínov in vivo z replikónov RNA sa môže výrazne zlepšiť ich zabalením do lipidových nanočastíc.Článok CAS PubMed PubMed Central Študovňa Google 
20. Pardi, N. a kol. Ochrana proti vírusu Zika jedinou vakcináciou mRNA s nízkou dávkou nukleozidov. Nature 543 , 248–251 (2017).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
21. Pardi, N. a kol. Kinetika expresie nukleozidmi modifikovanej mRNA dodávanej v lipidových nanočasticiach myšiam rôznymi cestami. J. Control. Vydanie 217 , 345–351 (2015).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
22. Bahl, K. a kol. Predklinická a klinická demonštrácia imunogenicity mRNA vakcín proti vírusom chrípky H10N8 a H7N9. Mol. Ther. 25 , 1316-1327 (2017). Toto je správa o klinickom skúšaní vakcín s použitím priamo vstrekovanej, nereplikujúcej sa nukleozidmi modifikovanej mRNA proti infekčnému patogénu.Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
23. Ross, J. & Sullivan, TD Polčasy beta a gama globínových messengerových RNA a kapacity na syntézu proteínov v kultivovaných ľudských retikulocytoch. Blood 66 , 1149-1154 (1985).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
24. Holtkamp, ​​S. a kol. Modifikácia antigén-kódujúcej RNA zvyšuje stabilitu, translačnú účinnosť a T-bunkovú stimulačnú kapacitu dendritických buniek. Blood 108 , 4009-4017 (2006).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
25. Gallie, DR Čiapočka a poly(A) chvost fungujú synergicky na reguláciu translačnej účinnosti mRNA. Genes Dev. 5 , 2108-2116 (1991).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
26. Martin, SA, Paoletti, E. & Moss, B. Purifikácia mRNA guanylyltransferázy a mRNA (guanín-7-) metyltransferázy z viriónov vakcínie. J. Biol. Chem. 250 , 9322-9329 (1975).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
27. Stepinski, J., Waddell, C., Stolarski, R., Darzynkiewicz, E. & Rhoads, RE Syntéza a vlastnosti mRNA obsahujúcich nové „anti-reverzné“ čiapočkové analógy 7-metyl(3′-O-metyl)GpppG a 7-metyl (3′-deoxy)GpppG. RNA 7 , 1486-1495 (2001).CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
28. Malone, RW, Felgner, PL & Verma, IM Transfekcia RNA sprostredkovaná katiónovými lipozómami. Proc. Natl Acad. Sci. USA 86 , 6077-6081 (1989).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
29. Gustafsson, C., Govindarajan, S. & Minshull, J. Codon bias and heterologous protein expression. Trends Biotechnol. 22 , 346-353 (2004).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
30. Mauro, VP & Chappell, SA Kritická analýza optimalizácie kodónov v humánnych terapeutikách. Trends Mol. Med. 20 , 604-613 (2014).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
31. Kudla, G., Lipinski, L., Caffin, F., Helwak, A. & Zylicz, M. Vysoký obsah guanínu a cytozínu zvyšuje hladiny mRNA v bunkách cicavcov. PLoS Biol. 4 , e180 (2006).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
32. Kudla, G., Murray, AW, Tollervey, D. & Plotkin, JB Kódujúce sekvenčné determinanty génovej expresie v Escherichia coli . Science 324 , 255-258 (2009).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
33. Buhr, F. a kol. Synonymné kodóny riadia kotranslačné skladanie smerom k rôznym proteínovým konformáciám. Mol. Cell 61 , 341-351 (2016).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
34. Yu, CH a kol. Použitie kodónov ovplyvňuje lokálnu rýchlosť predlžovania translácie na reguláciu ko-translačného skladania proteínov. Mol. Cell 59 , 744-754 (2015).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
35. Chen, N. a kol. RNA senzory vrodeného imunitného systému a ich detekcia patogénov. IUBMB Life 69 , 297–304 (2017).Článok CAS PubMed PubMed Central Študovňa Google 
36. Fotin-Mleczek, M. a kol. Vakcíny na báze Messenger RNA s duálnou aktivitou vyvolávajú vyvážené adaptívne imunitné reakcie závislé od TLR-7 a poskytujú protinádorovú aktivitu. J. Immunother. 34 , 1-15 (2011).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
37. Rettig, L. a kol. Veľkosť častíc a aktivačný prah: nová dimenzia signalizácie nebezpečenstva. Blood 115 , 4533-4541 (2010).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
38. de Haro, C., Mendez, R. & Santoyo, J. eIF-2α kinázy a kontrola syntézy proteínov. FASEB J. 10 , 1378-1387 (1996).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
39. Liang, SL, Quirk, D. & Zhou, A. RNáza L: jej biologické úlohy a regulácia. IUBMB Life 58 , 508-514 (2006).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
40. Zhang, Z. a kol. Štrukturálna analýza ukazuje, že Toll-like receptor 7 je duálny receptor pre guanozín a jednovláknovú RNA. Imunita 45 , 737-748 (2016).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
41. Tanji, H. a kol. Toll-like receptor 8 sníma produkty degradácie jednovláknovej RNA. Nat. Struct. Mol. Biol. 22 , 109-115 (2015).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
42. Isaacs, A., Cox, RA & Rotem, Z. Cudzie nukleové kyseliny ako stimul na tvorbu interferónu. Lancet 2 , 113-116 (1963).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
43. Schwartz, S. a kol. Mapovanie v rámci celého transkriptómu odhaľuje rozšírenú dynamicky regulovanú pseudouridyláciu ncRNA a mRNA. Cell 159 , 148-162 (2014).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
44. Carlile, TM a kol. Pseudouridínové profilovanie odhaľuje regulovanú pseudouridyláciu mRNA v kvasinkách a ľudských bunkách. Nature 515 , 143–146 (2014).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
45. Andries, O. a kol. mRNA inkorporovaná N1 ^– metylpseudouridínom prekonáva mRNA inkorporovanú pseudouridínom tým, že poskytuje zvýšenú proteínovú expresiu a zníženú imunogenicitu v cicavčích bunkových líniách a myšiach. J. Control. Vydanie 217 , 337–344 (2015).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
46. Anderson, BR a kol. Začlenenie pseudouridínu do mRNA zvyšuje transláciu znížením aktivácie PKR. Nucleic Acids Res. 38 , 5884-5892 (2010).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
47. Anderson, BR a kol. Nukleozidové modifikácie v RNA obmedzujú aktiváciu 2′-5′-oligoadenylátsyntetázy a zvyšujú odolnosť voči štiepeniu RNázou L. Nucleic Acids Res. 39 , 9329-9338 (2011).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
48. Kariko, K., Buckstein, M., Ni, H. & Weissman, D. Potlačenie rozpoznávania RNA receptormi podobnými Toll: vplyv modifikácie nukleozidov a evolučný pôvod RNA. Imunita 23 , 165-175 (2005). Táto správa ukazuje, že nukleozidová modifikácia mRNA znižuje zápalové reakcie.Článok CAS PubMed Študovňa Google 
49. Kauffman, KJ a kol. Účinnosť a imunogenicita nemodifikovanej a pseudouridínom modifikovanej mRNA dodávanej systémovo s lipidovými nanočasticami in vivo . Biomateriály 109 , 78-87 (2016).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
50. Brito, LA a kol. Katiónová nanoemulzia na dodávanie RNA vakcín novej generácie. Mol. Ther. 22 , 2118-2129 (2014).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
51. Van Lint, S. a kol. ReNAissanCe terapie rakoviny založenej na mRNA. Expert Rev. Vaccines 14 , 235-251 (2015).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
52. Kallen, KJ a kol. Nová, prevratná technológia očkovania: vakcíny ^{RNActive® s vlastným adjuvantom.} Hum. Vaccin Immunother. 9 , 2263-2276 (2013).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
53. Rauch, S., Lutz, J., Kowalczyk, A., Schlake, T. & Heidenreich, R. Technológia RNActive ^® : generovanie a testovanie stabilných a imunogénnych mRNA vakcín. Metódy Mol. Biol. 1499 , 89-107 (2017).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
54. Edwards, DK a kol. Adjuvantné účinky sekvenčne upravenej mRNA vakcíny: translačné profilovanie demonštruje podobnú ľudskú a myšaciu vrodenú odpoveď. J. Transl Med. 15 , 1 (2017).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
55. Kowalczyk, A. a kol. Samoadjuvované mRNA vakcíny indukujú lokálne vrodené imunitné reakcie, ktoré vedú k silnej a zosilnenej adaptívnej imunite. Vaccine 34 , 3882-3893 (2016).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
56. Schnee, M. a kol. mRNA vakcína kódujúca glykoproteín vírusu besnoty indukuje ochranu pred letálnou infekciou u myší a koreluje s ochranou u dospelých a novonarodených ošípaných. PLoS Negl. Trop. Dis. 10 , e0004746 (2016).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
57. Ziegler, A. a kol. Nové adjuvans na báze RNA zvyšuje vírusovo špecifické reakcie na vakcínu lokálnym spúšťaním účinkov závislých od TLR a RLH. J. Immunol. 198 , 1595 – 1605 (2017).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
58. Benteyn, D., Heirman, C., Bonehill, A., Thielemans, K. & Breckpot, K. Vakcíny dendritických buniek na báze mRNA. Expert Rev. Vaccines 14 , 161-176 (2015).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
59. Kranz, LM a kol. Systémové dodávanie RNA do dendritických buniek využíva antivírusovú obranu na imunoterapiu rakoviny. Nature 534 , 396-401 (2016).Článok PubMed CAS Študovňa Google 
60. Wykes, M., Pombo, A., Jenkins, C. & MacPherson, GG Dendritické bunky interagujú priamo s naivnými B lymfocytmi, aby preniesli antigén a iniciovali prepínanie tried v primárnej T-dependentnej odpovedi. J. Immunol. 161 , 1313-1319 (1998).CAS PubMed Študovňa Google 
61. Selmi, A. a kol. Príjem syntetickej nahej RNA dendritickými bunkami rezidentnými na koži prostredníctvom makropinocytózy umožňuje expresiu antigénu a indukciu reakcií T-buniek u myší. Cancer Immunol. Imunother. 65 , 1075-1083 (2016).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
62. Diken, M. a kol. Selektívny príjem nahej vakcínovej RNA dendritickými bunkami je riadený makropinocytózou a je zrušený po zrení DC. Gene Ther. 18 , 702-708 (2011).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
63. Lorenz, C. a kol. Expresia proteínu z exogénnej mRNA: príjem endocytózou sprostredkovanou receptorom a prenos cez lyzozomálnu dráhu. RNA Biol. 8 , 627-636 (2011).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
64. Gehl, J. Elektroporácia: teória a metódy, perspektívy podávania liekov, génová terapia a výskum. Acta Physiol. Scand. 177 , 437-447 (2003).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
65. Granstein, RD, Ding, W. & Ozawa, H. Indukcia protinádorovej imunity s epidermálnymi bunkami pulzovanými s RNA odvodenou od nádoru alebo intradermálnym podaním RNA. J. Invest. Dermatol. 114 , 632-636 (2000).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
66. Kreiter, S. a kol. Intranodálna vakcinácia holou RNA kódujúcou antigén vyvoláva silnú profylaktickú a terapeutickú protinádorovú imunitu. Cancer Res. 70 , 9031-9040 (2010).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
67. Bialkowski, L. a kol. Intralymfatická mRNA vakcína indukuje reakcie CD8 T-buniek, ktoré inhibujú rast na slizniciach umiestnených nádorov. Sci. Rep. 6 , 22509 (2016).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
68. Sahin, U. a kol. Personalizované RNA mutanómové vakcíny mobilizujú polyšpecifickú terapeutickú imunitu proti rakovine. Nature 547 , 222–226 (2017).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
69. Qiu, P., Ziegelhoffer, P., Sun, J. & Yang, NS Dodávanie mRNA in situ pomocou génovej pištole vedie k účinnej expresii transgénu a genetickej imunizácii. Gene Ther. 3 , 262-268 (1996).CAS PubMed Študovňa Google 
70. Steitz, J., Britten, CM, Wolfel, T. & Tuting, T. Účinná indukcia anti-melanómovej imunity po genetickej vakcinácii so syntetickou mRNA kódujúcou fúzny proteín EGFP.TRP2. Cancer Immunol. Imunother. 55 , 246-253 (2006).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
71. Aberle, JH, Aberle, SW, Kofler, RM & Mandl, CW Humorálna a bunková imunitná odpoveď na imunizáciu RNA replikónmi flavivírusu odvodenými z vírusu kliešťovej encefalitídy. J. Virol. 79 , 15107-15113 (2005).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
72. Kofler, RM a kol. Napodobňovanie imunizácie živým flavivírusom neinfekčnou RNA vakcínou. Proc. Natl Acad. Sci. USA 101 , 1951 – 1956 (2004).Článok CAS PubMed PubMed Central Študovňa Google 
73. Mandl, CW a kol. In vitro syntetizovaná infekčná RNA ako oslabená živá vakcína vo flavivírusovom modeli. Nat. Med. 4 , 1438-1440 (1998).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
74. Johansson, DX, Ljungberg, K., Kakoulidou, M. & Liljestrom, P. Intradermálna elektroporácia nahej replikónovej RNA vyvoláva silné imunitné reakcie. PLoS ONE 7 , e29732 (2012).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
75. Piggott, JM, Sheahan, BJ, Soden, DM, O’Sullivan, GC & Atkins, GJ Elektroporácia RNA stimuluje imunitu voči kódovanému reportérovému génu u myší. Mol. Med. Rep. 2 , 753-756 (2009).CAS PubMed Študovňa Google 
76. Broderick, KE & Humeau, LM Elektroporáciou zosilnená dodávka vakcín s nukleovou kyselinou. Expert Rev. Vaccines 14 , 195-204 (2015).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
77. Hoerr, I., Obst, R., Rammensee, HG & Jung, G. In vivo aplikácia RNA vedie k indukcii špecifických cytotoxických T lymfocytov a protilátok. Eur. J. Immunol. 30 , 1-7 (2000).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
78. Schlake, T., Thess, A., Fotin-Mleczek, M. & Kallen, KJ Developing mRNA-vaccine technologies. RNA Biol. 9 , 1319-1330 (2012).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
79. Reichmuth, AM, Oberli, MA, Jeklenec, A., Langer, R. & Blankschtein, D. Dodávanie mRNA vakcíny pomocou lipidových nanočastíc. Ther. Deliv. 7 , 319-334 (2016).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
80. Midoux, P. & Pichon, C. Systémy dodávania vakcín mRNA na báze lipidov. Expert Rev. Vaccines 14 , 221-234 (2015).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
81. Kanasty, R., Dorkin, JR, Vegas, A. & Anderson, D. Dodávacie materiály pre siRNA terapeutiká. Nat. Mater. 12 , 967-977 (2013).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
82. Akinc, A. a kol. Cielené dodávanie RNAi terapeutík s endogénnymi a exogénnymi mechanizmami založenými na ligandoch. Mol. Ther. 18 , 1357-1364 (2010).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
83. Ratajczak, MZ & Ratajczak, J. Horizontálny prenos RNA a proteínov medzi bunkami extracelulárnymi mikrovezikulami: o 14 rokov neskôr. Clin. Transl Med. 5 , 7 (2016).PubMed Central PubMed Študovňa Google 
84. Tam, HH a kol. Trvalá dostupnosť antigénu počas iniciácie zárodočného centra zvyšuje protilátkovú odpoveď na očkovanie. Proc. Natl Acad. Sci. USA 113 , E6639 – E6648 (2016).Článok CAS PubMed PubMed Central Študovňa Google 
85. Richner, JM a kol. Vakcíny s modifikovanou mRNA chránia pred infekciou vírusom Zika. Cell 168 , 1114-1125.e10 (2017).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
86. Havenar-Daughton, C., Lee, JH & Crotty, S. Tfh bunky a HIV bnAbs, model imunodominancie problému tvorby protilátok neutralizujúcich HIV. Immunol. 275 , 49-61 (2017) .Článok CAS PubMed Študovňa Google 
87. Brito, LA a kol. Samoamplifikačné mRNA vakcíny. Adv. Genet. 89 , 179-233 (2015).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
88. Chahal, JS a kol. RNA nanočasticová vakcína proti vírusu Zika vyvoláva protilátkové a CD8 ⁺ T bunkové reakcie v myšom modeli. Sci. Rep. 7 , 252 (2017).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
89. Chahal, JS a kol. Nanočastice dendrimer-RNA vytvárajú ochrannú imunitu proti smrteľnej ebole, chrípke H1N1 a Toxoplasma gondii s jedinou dávkou. Proc. Natl Acad. Sci. USA 113 , E4133 – E4142 (2016).Článok CAS PubMed PubMed Central Študovňa Google 
90. Ulmer, JB & Geall, AJ Nedávne inovácie v mRNA vakcínach. Curr. Opin. Immunol. 41 , 18-22 (2016).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
91. Alberer, M. a kol. Bezpečnosť a imunogenicita mRNA vakcíny proti besnote u zdravých dospelých: otvorená, nerandomizovaná, prospektívna, prvá klinická štúdia fázy 1 u ľudí. Lancet 390 , 1511 – 1520 (2017). Toto je správa o klinickom skúšaní vakcín s použitím priamo injikovanej, nereplikujúcej sa, nemodifikovanej mRNA proti infekčnému patogénu.Článok CAS PubMed Študovňa Google 
92. Perri, S. a kol. Alfavírusová replikónová časticová chiméra odvodená z venezuelskej konskej encefalitídy a vírusov sindbis je účinným vektorom na dodávanie vakcín na báze génov. J. Virol. 77 , 10394-10403 (2003).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
93. Fleeton, MN a kol. Samoreplikatívne RNA vakcíny vyvolávajú ochranu pred vírusom chrípky A, respiračným syncyciálnym vírusom a vírusom kliešťovej encefalitídy. J. Infect. Dis. 183 , 1395-1398 (2001). Toto je skorá správa o ochrannej účinnosti, ktorá je výsledkom samoamplifikujúcich sa mRNA vakcín proti infekčným patogénom.Článok CAS PubMed Študovňa Google 
94. Magini, D. a kol. Samoamplifikujúce sa mRNA vakcíny exprimujúce viaceré konzervované chrípkové antigény poskytujú ochranu proti homológnej a heterosubtypickej vírusovej expozícii. PLoS ONE 11 , e0161193 (2016).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
95. Hekele, A. a kol. Rýchlo vyrobená vakcína SAM ^® proti chrípke H7N9 je u myší imunogénna. Emerg. Mikróby infikujú. 2 , e52 (2013).Článok PubMed Central PubMed Študovňa Google 
96. Brazzoli, M. a kol. Indukcia širokej imunity a ochrannej účinnosti samoamplifikačnými mRNA vakcínami kódujúcimi hemaglutinín vírusu chrípky. J. Virol. 90 , 332-344 (2015).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
97. Bogers, WM a kol. Silné imunitné reakcie u makakov rhesus vyvolané nevírusovým podaním samoamplifikačnej RNA vakcíny exprimujúcej obal HIV typu 1 s katiónovou nanoemulziou. J. Infect. Dis. 211 , 947-955 (2015).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
98. McCullough, KC a kol. Samoreplikujúce sa dodávanie replikónu-RNA do dendritických buniek pomocou chitosanových nanočastíc na transláciu in vitro a in vivo . Mol. Ther. Nucleic Acids 3 , e173 (2014).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
99. Demoulins, T. a kol. Polyplexná dodávka samoreplikujúcich sa RNA vakcín na báze polyetylénimínu. Nanomedicína 12 , 711-722 (2016).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
100. Maruggi, G. a kol. Imunogenicita a ochranná účinnosť indukovaná samoamplifikujúcimi sa mRNA vakcínami kódujúcimi bakteriálne antigény. Vaccine 35 , 361–368 (2017).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
101. Van Gulck, E. a kol. Vakcinácia dendritickými bunkami založená na mRNA indukuje silné antivírusové reakcie T-buniek u pacientov infikovaných HIV-1. AIDS 26 , F1–F12 (2012).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
102. Routy, JP a kol. Imunologická aktivita a bezpečnosť autológnych HIV RNA elektroporovaných dendritických buniek u pacientov infikovaných HIV-1, ktorí dostávajú antiretrovírusovú liečbu. Clin. Immunol. 134 , 140-147 (2010).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
103. Allard, SD a kol. Imunoterapeutická štúdia fázy I/IIa u pacientov infikovaných HIV-1 s dendritickými bunkami exprimujúcimi Tat, Rev a Nef s následným prerušením liečby. Clin. Immunol. 142 , 252-268 (2012).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
104. Gandhi, RT a kol. Imunizácia osôb infikovaných HIV-1 autológnymi dendritickými bunkami transfekovanými mRNA kódujúcou HIV-1 Gag a Nef: výsledky randomizovanej, placebom kontrolovanej klinickej štúdie. J. Acquir. Immune Def. Syndr. 71 , 246-253 (2016).Článok CAS Študovňa Google 
105. Jacobson, JM a kol. Imunoterapia dendritických buniek pre infekciu HIV-1 s použitím autológnej HIV-1 RNA: randomizovaná, dvojito zaslepená, placebom kontrolovaná klinická štúdia. J. Acquir. Immune Def. Syndr. 72 , 31-38 (2016).Článok CAS Študovňa Google 
106. Gay, CL a kol. Imunogenicita terapie dendritickými bunkami AGS-004 u pacientov liečených počas akútnej infekcie HIV. AIDS Res. Hum. Retrovírusy 10.1089/aid.2017.0071 (2017).
107. Van Craenenbroeck, AH a kol. Indukcia odpovedí T-buniek špecifických pre cytomegalovírus u zdravých dobrovoľníkov a príjemcov alogénnych kmeňových buniek pomocou očkovania dendritickými bunkami transfekovanými mediátorovou RNA. Transplantácia 99 , 120–127 (2015).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
108. Martinon, F. a kol. Indukcia vírusovo špecifických cytotoxických T lymfocytov in vivo mRNA zachytenou v lipozómoch. Eur. J. Immunol. 23 , 1719-1722 (1993). Táto skorá štúdia ukazuje, že mRNA zapuzdrená v lipozómoch kódujúca vírusový antigén indukuje reakcie T buniek.Článok CAS PubMed Študovňa Google 
109. Pollard, C. a kol. IFN typu I pôsobí proti indukcii antigén-špecifických imunitných reakcií dodávaním mRNA vakcín na báze lipidov. Mol. Ther. 21 , 251-259 (2013).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
110. Zhao, M., Li, M., Zhang, Z., Gong, T. & Sun, X. Indukcia HIV-1 gag špecifických imunitných reakcií katiónovými micelami sprostredkovaného dodaním gag mRNA. Drug Deliv. 23 , 2596-2607 (2016).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
111. Li, M. a kol. Vylepšené intranazálne podávanie mRNA vakcíny prekonaním nosovej epiteliálnej bariéry prostredníctvom intra- a paracelulárnych dráh. J. Control. Vydanie 228 , 9-19 (2016).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
112. Richner, JM a kol. Vakcínou sprostredkovaná ochrana proti vrodenému ochoreniu vyvolanému vírusom Zika. Cell 170 , 273-283.e12 (2017).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
113. Roman, F., Vaman, T., Kafeja, F., Hanon, E. & Van Damme, P. AS03(A)-adjuvovaná vakcína proti chrípke A (H1N1) 2009 pre dospelých do 85 rokov. Clin. Infikovať. Dis. 51 , 668-677 (2010).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
114. Zarei, S. a kol. Imunogenicita a reaktogenita dvoch vakcín proti záškrtu, tetanu a celobunkovému čiernemu kašľu u iránskych predškolských detí, randomizovaná kontrolovaná štúdia. Hum. Vaccin. Imunother. 9 , 1316-1322 (2013).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
115. Diken, M., Kranz, LM, Kreiter, S. & Sahin, U. mRNA: všestranná molekula pre vakcíny proti rakovine. Curr. Vydáva Mol. Biol. 22 , 113-128 (2017).Článok PubMed Študovňa Google 
116. Fiedler, K., Lazzaro, S., Lutz, J., Rauch, S. & Heidenreich, R. mRNA vakcíny proti rakovine. Najnovšie výsledky Cancer Res. 209 , 61-85 (2016).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
117. Grunwitz, C. & Kranz, LM mRNA vakcíny proti rakovine – správy, ktoré prevládajú. Curr. Hore. Microbiol. Immunol. 405 , 145 – 164 (2017).CAS PubMed Študovňa Google 
118. McNamara, MA, Nair, SK & Holl, EK RNA-Based Vaccines in Cancer Immunotherapy. J. Immunol. Res. 2015 , 794528 (2015).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
119. Sullenger, BA & Nair, S. Zo sveta RNA na kliniku. Science 352 , 1417 – 1420 (2016).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
120. Vigneron, N. Ľudské nádorové antigény a imunoterapia rakoviny. Biomed. Res. Int. 2015 , 948501 (2015).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
121. Tureci, O. a kol. Zameranie na heterogenitu rakoviny pomocou individualizovaných neoepitopových vakcín. Clin. Cancer Res. 22 , 1885 – 1896 (2016).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
122. Coulie, PG, Van den Eynde, BJ, van der Bruggen, P. & Boon, T. Nádorové antigény rozpoznávané T lymfocytmi: jadro imunoterapie rakoviny. Nat. Rev. Cancer 14 , 135-146 (2014).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
123. Conry, RM a kol. Charakterizácia messenger RNA polynukleotidového vakcínového vektora. Cancer Res. 55 , 1397-1400 (1995).CAS PubMed Študovňa Google 
124. Boczkowski, D., Nair, SK, Snyder, D. & Gilboa, E. Dendritické bunky pulzované RNA sú silné bunky prezentujúce antigén in vitro a in vivo . J. Exp. Med. 184 , 465-472 (1996). Táto správa demonštruje účinnosť vakcín mRNA DC.Článok CAS PubMed Študovňa Google 
125. De Keersmaecker, B. a kol. Kombinácia 4-1BBL a CD40L silne zvyšuje kapacitu dendritických buniek stimulovať HIV-špecifické reakcie T-buniek. J. Leukoc. Biol. 89 , 989-999 (2011).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
126. Dannull, J. a kol. Posilnenie imunostimulačnej funkcie dendritických buniek transfekciou mRNA kódujúcou ligand OX40. Blood 105 , 3206-3213 (2005).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
127. Aerts-Toegaert, C. a kol. Expresia CD83 na dendritických bunkách a T bunkách: korelácia s účinnými imunitnými odpoveďami. Eur. J. Immunol. 37 , 686-695 (2007).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
128. Grunebach, F. a kol. Kotransfekcia dendritických buniek s RNA kódujúcou HER-2/neu a 4-1BBL zvyšuje indukciu cytotoxických T lymfocytov špecifických pre nádorový antigén. Cancer Gene Ther. 12 , 749–756 (2005).Článok PubMed CAS Študovňa Google 
129. Bontkes, HJ, Kramer, D., Ruizendaal, JJ, Meijer, CJ & Hooijberg, E. Dendritické bunky transfekované antigénom spojeným s nádorom a interleukínom-12 mRNA zvyšujú efektorovú funkciu prirodzených zabíjačských buniek a antigén špecifických T-buniek. Clin. Immunol. 127 , 375-384 (2008).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
130. Bontkes, HJ a kol. Dendritické bunky transfekované interleukínom-12 a s nádorom asociovanou antigénovou mediátorovou RNA indukujú cytotoxické T bunky s vysokou aviditou. Gene Ther. 14 , 366-375 (2007).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
131. Dorrie, J. a kol. Zavedenie funkčného chimérického E/L-selektínu elektroporáciou RNA do cieľových dendritických buniek z krvi do lymfatických uzlín. Cancer Immunol. Imunother. 57 , 467-477 (2008).Článok PubMed CAS Študovňa Google 
132. Bonehill, A. a kol. Zvýšenie T-bunkovej stimulačnej kapacity ľudských dendritických buniek spoločnou elektroporáciou s CD40L, CD70 a konštitutívne aktívnou TLR4 kódujúcou mRNA. Mol. Ther. 16 , 1170-1180 (2008). Toto je opis TriMix mRNA adjuvantného koktailu.Článok CAS PubMed Študovňa Google 
133. Van Lint, S. a kol. Predklinické hodnotenie protinádorovej liečby TriMix a antigénovej mRNA. Cancer Res. 72 , 1661 – 1671 (2012).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
134. Van Lint, S. a kol. Optimalizovaná imunoterapia melanómu na báze dendritických buniek: vzorec TriMix. Cancer Immunol. Imunother. 63 , 959-967 (2014).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
135. Pen, JJ a kol. Modulácia funkcie regulačných T-buniek dendritickými bunkami odvodenými od monocytov dozrievanými elektroporáciou s mRNA kódujúcou ligand CD40, konštitutívne aktívny TLR4 a CD70. J. Immunol. 191 , 1976-1983 (2013).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
136. Wilgenhof, S. a kol. Terapeutická vakcinácia autológnou mRNA elektroporovanou vakcínou proti dendritickým bunkám u pacientov s pokročilým melanómom. J. Immunother. 34 , 448-456 (2011).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
137. Wilgenhof, S. a kol. Štúdia fázy IB o intravenóznej imunoterapii dendritických buniek elektroporovanou syntetickou mRNA u predliečených pacientov s pokročilým melanómom. Ann. Oncol. 24 , 2686-2693 (2013).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
138. Mitchell, DA a kol. Tetanový toxoid a CCL3 zlepšujú vakcíny dendritických buniek u myší a pacientov s glioblastómom. Nature 519 , 366–369 (2015).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
139. Batich, KA a kol. Dlhodobé prežitie pri glioblastóme s očkovaním cieleným na cytomegalovírus pp65. Clin. Cancer Res. 23 , 1898-1909 (2017).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
140. Wilgenhof, S. a kol. Štúdia fázy II autológnych dendritických buniek mRNA derivovaných z monocytov (TriMixDC-MEL) plus ipilimumab u pacientov s predliečeným pokročilým melanómom. J. Clin. Oncol. 34 , 1330-1338 (2016).Článok PubMed Študovňa Google 
141. Zhou, WZ a kol. Vakcína proti RNA melanómu: indukcia protinádorovej imunity imunizáciou ľudským glykoproteínom 100 mRNA. Hum. Gene Ther. 10 , 2719-2724 (1999).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
142. Kreiter, S. a kol. FLT3 ligand ako molekulárne adjuvans pre nahé RNA vakcíny. Metódy Mol. Biol. 1428 , 163 – 175 (2016).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
143. Kreiter, S. a kol. Ligand FLT3 zvyšuje protirakovinovú terapeutickú účinnosť nahých RNA vakcín. Cancer Res. 71 , 6132-6142 (2011).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
144. Bol, KF a kol. Intranodálna vakcinácia dendritickými bunkami optimalizovanými pre mRNA u pacientov s metastatickým melanómom. Oncoimmunology 4 , e1019197 (2015).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
145. Phua, KK, Staats, HF, Leong, KW & Nair, SK Intranazálna vakcinácia mRNA nanočasticami vyvoláva profylaktickú a terapeutickú protinádorovú imunitu. Sci. Rep. 4 , 5128 (2014).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
146. Scheel, B. a kol. Terapeutická protinádorová imunita spúšťaná injekciami imunostimulačnej jednovláknovej RNA. Eur. J. Immunol. 36 , 2807-2816 (2006).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
147. Van der Jeught, K. a kol. Intratumorálne podanie mRNA kódujúcej fusokín pozostávajúci z IFN-p a ektodomény TGF-p receptora II zosilňuje protinádorovú imunitu. Oncotarget 5 , 10100-10113 (2014).Článok PubMed Central PubMed Študovňa Google 
148. Van Lint, S. a kol. Intratumorálne podanie TriMix mRNA vedie k aktivácii T-buniek krížovým prezentovaním dendritických buniek. Cancer Immunol. Res. 4 , 146-156 (2016).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
149. Clausen, BE & Stoitzner, P. Funkčná špecializácia podskupín kožných dendritických buniek pri regulácii odpovedí T buniek. Predné. Immunol. 6 , 534 (2015).Článok PubMed Central PubMed Študovňa Google 
150. Weide, B. a kol. Priama injekcia protamínovo chránenej mRNA: výsledky vakcinačnej štúdie fázy 1/2 u pacientov s metastatickým melanómom. J. Immunother. 32 , 498-507 (2009).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
151. Kubler, H. a kol. Samoadjuvovaná mRNA vakcinácia u pacientov s pokročilou rakovinou prostaty: štúdia fázy I/IIa prvého človeka. J. Immunother. Rakovina 3 , 26 (2015).Článok PubMed Central PubMed Študovňa Google 
152. Hess, PR, Boczkowski, D., Nair, SK, Snyder, D. & Gilboa, E. Vakcinácia s mRNA kódujúcou antigény spojené s nádorom a faktor stimulujúci kolónie granulocytov a makrofágov účinne spúšťa CTL reakcie, ale je nedostatočná na prekonanie tolerancie voči modelovému nádorovému/vlastnému antigénu. Cancer Immunol. Imunother. 55 , 672-683 (2006).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
153. Oberli, MA a kol. Lipidové nanočastice asistovali dodávanie mRNA pre silnú imunoterapiu rakoviny. Nano Lett. 17 , 1326-1335 (2017).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
154. Fotin-Mleczek, M. a kol. Vysoko účinné vakcíny proti rakovine na báze mRNA predstavujú atraktívnu platformu pre kombinované terapie podporujúce zlepšený terapeutický účinok. J. Gene Med. 14 , 428-439 (2012).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
155. Fotin-Mleczek, M. a kol. Vakcíny na báze mRNA synergizujú s radiačnou terapiou na eradikáciu etablovaných nádorov. Radiat. Oncol. 9 , 180 (2014).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
156. Pascolo, S. Messenger Vakcíny na báze RNA. Expert Opin. Biol. Ther. 4 , 1285-1294 (2004).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
157. Geall, AJ, Mandl, CW & Ulmer, JB RNA: nová revolúcia vo vakcínach na báze nukleových kyselín. Semin. Immunol. 25 , 152-159 (2013).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
158. Weissman, D., Pardi, N., Muramatsu, H. & Kariko, K. HPLC purifikácia in vitro transkribovanej dlhej RNA. Metódy Mol. Biol. 969 , 43-54 (2013).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
159. Muralidhara, BK a kol. Kritické úvahy pre vývoj liekových produktov na báze makromolekúl nukleových kyselín. Drug Discov. Dnes 21 , 430–444 (2016).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
160. Jones, KL, Drane, D. & Gowans, EJ Dlhodobé skladovanie RNA bez DNA na použitie v štúdiách vakcín. Biotechniques 43 , 675-681 (2007).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
161. Probst, J. a kol. Charakterizácia ribonukleázovej aktivity na povrchu kože. Genet. Vakcíny Ther. 4 , 4 (2006).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
162. US Food & Drug Administration. Usmernenie pre priemysel: Úvahy o vakcínach s plazmidovou DNA pre indikácie infekčných chorôb. US Food & Drug Administration https://www.fda.gov/downloads/BiologicsBloodVaccines/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/Vaccines/ucm091968.pdf (2007).
163. US Food & Drug Administration. Usmernenie pre priemysel: Usmernenie pre ľudskú somatickú bunkovú terapiu a génovú terapiu. US Food & Drug Administration https://www.fda.gov/downloads/BiologicsBloodVaccines/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/CellularandGeneTherapy/ucm081670.pdf (1998).
164. Európska lieková agentúra. Smernica Komisie 2009/120/ES. Európska komisia https://ec.europa.eu/health//sites/health/files/files/eudralex/vol-1/dir_2009_120/dir_2009_120_en.pdf (2009).
165. Hinz, T. a kol. Európske regulačné prostredie vakcín na báze RNA. Metódy Mol. Biol. 1499 , 203 – 222 (2017).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
166. Pepini, T. a kol. Indukcia antivírusovej odpovede sprostredkovanej IFN samoamplifikujúcou RNA vakcínou: dôsledky pre návrh vakcíny. J. Immunol. 198 , 4012-4024 (2017).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
167. Theofilopoulos, AN, Baccala, R., Beutler, B. & Kono, DH interferóny typu I (α/β) v imunite a autoimunite. Annu. Rev. Immunol. 23 , 307-336 (2005).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
168. Nestlé, FO a kol. Plazmacytoidné preddendritické bunky iniciujú psoriázu prostredníctvom produkcie interferónu-a. J. Exp. Med. 202 , 135-143 (2005).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
169. Fischer, S. a kol. Extracelulárna RNA sprostredkúva permeabilitu endotelových buniek prostredníctvom vaskulárneho endotelového rastového faktora. Blood 110 , 2457-2465 (2007).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
170. Kannemeier, C. a kol. Extracelulárna RNA predstavuje prirodzený prokoagulačný kofaktor pri zrážaní krvi. Proc. Natl Acad. Sci. USA 104 , 6388-6393 (2007).Článok CAS PubMed PubMed Central Študovňa Google 
171. Liu, MA & Ulmer, JB Ľudské klinické skúšky vakcín plazmidovej DNA. Adv. Genet. 55 , 25-40 (2005).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
172. DeFrancesco, L. Vakcína „proti humbuku“. Nat. Biotechnol. 35 , 193-197 (2017).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
173. Servick, K. O správe. Science 355 , 446 – 450 (2017).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
174. CureVac AG. Od vedy k pacientom – nápady sa v CureVac stávajú liečbou. CureVac http://www.curevac.com/research-development (2017).
175. Aldevron. Aldevron rozširuje výrobný závod v Severnej Dakote. Aldevron http://www.aldevron.com/about-us/news/aldevron-expands-north-dakota-biomanufacturing-facility (2016).
176. Kreiter, S. a kol. Mutantné epitopy MHC triedy II riadia terapeutické imunitné reakcie na rakovinu. Nature 520 , 692–696 (2015).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
177. Ott, PA a kol. Imunogénna osobná neoantigénová vakcína pre pacientov s melanómom. Nature 547 , 217–221 (2017).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
178. Jacobson, EB, Caporale, LH & Thorbecke, GJ Účinok injekcií buniek týmusu na tvorbu zárodočných centier v lymfoidných tkanivách nahých myší (bez týmusu). Cell. Immunol. 13 , 416-430 (1974).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
179. Forster, R., Emrich, T., Kremmer, E. & Lipp, M. Expresia receptora BLR1 spojeného s G-proteínom definuje zrelé, recirkulujúce B bunky a podskupinu T-pomocných pamäťových buniek. Blood 84 , 830-840 (1994).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
180. Forster, R. a kol. Predpokladaný chemokínový receptor, BLR1, riadi migráciu B buniek do definovaných lymfoidných orgánov a špecifických anatomických kompartmentov sleziny. Cell 87 , 1037-1047 (1996).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
181. Breitfeld, D. a kol. Folikulárne B pomocné T bunky exprimujú CXC chemokínový receptor 5, lokalizujú sa vo folikuloch B buniek a podporujú produkciu imunoglobulínu. J. Exp. Med. 192 , 1545-1552 (2000).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
182. Schaerli, P. a kol. Expresia CXC chemokínového receptora 5 definuje folikulárne navádzacie T bunky s pomocnou funkciou B buniek. J. Exp. Med. 192 , 1553-1562 (2000).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
183. Johnston, RJ a kol. Bcl6 a Blimp-1 sú recipročné a antagonistické regulátory diferenciácie T folikulárnych pomocných buniek. Science 325 , 1006-1010 (2009).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
184. Nurieva, RI a kol. Bcl6 sprostredkováva vývoj T folikulárnych pomocných buniek. Science 325 , 1001-1005 (2009).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
185. Yu, D. a kol. Transkripčný represor Bcl-6 riadi viazanosť T folikulárnej pomocnej bunkovej línie. Imunita 31 , 457-468 (2009).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
186. Crotty, S. Stručná história pomoci T buniek B bunkám. Nat. Rev. Immunol. 15 , 185-189 (2015).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
187. Klein, F. a kol. Protilátky vo vývoji a liečbe HIV-1 vakcíny. Science 341 , 1199-1204 (2013).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
188. Gils, A., Bertolotto, A., Mulleman, D., Bejan-Angoulvant, T. & Declerck, PJ Biopharmaceuticals: referenčné produkty a biologicky podobné lieky na liečbu zápalových ochorení. Ther. Drug Monit. 39 , 308-315 (2017).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
189. Sparrow, E., Friede, M., Sheikh, M. & Torvaldsen, S. Terapeutické protilátky pre infekčné choroby. Bull. Svetový zdravotnícky orgán. 95 , 235-237 (2017).Článok PubMed Central PubMed Študovňa Google 
190. Henricks, LM, Schellens, JH, Huitema, AD & Beijnen, JH Použitie kombinácií monoklonálnych protilátok v klinickej onkológii. Liečba rakoviny. Rev. 41 , 859-867 (2015).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
191. Lewiecki, EM Liečba osteoporózy denosumabom. Maturitas 66 , 182 – 186 (2010).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
192. Paton, DM Inhibítory PCSK9: monoklonálne protilátky na liečbu hypercholesterolémie. Drugs Today 52 , 183–192 (2016).Článok CAS Študovňa Google 
193. Hollevoet, K. & Declerck, PJ Súčasný stav a klinické vyhliadky prenosu génu protilátky. J. Transl Med. 15 , 131 (2017).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
194. Fuchs, SP & Desrosiers, RC Promise a problémy spojené s použitím rekombinantného AAV na dodávanie anti-HIV protilátok. Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 3 , 16068 (2016).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
195. Boczkowski, D., Lee, J., Pruitt, S. & Nair, S. Dendritické bunky upravené tak, aby vylučovali anti-GITR protilátky, sú účinnými adjuvans pre imunoterapiu na báze dendritických buniek. Cancer Gene Ther. 16 , 900-911 (2009).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
196. Pruitt, SK a kol. Posilnenie protinádorovej imunity prostredníctvom lokálnej modulácie CTLA-4 a GITR dendritickými bunkami. Eur. J. Immunol. 41 , 3553-3563 (2011).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
197. Pardi, N. a kol. Podávanie nukleozidmi modifikovanej mRNA kódujúcej široko neutralizujúcu protilátku chráni humanizované myši pred infekciou HIV-1. Nat. komun. 8 , 14630 (2017). Toto je prvá štúdia, ktorá demonštruje, že priamo injikovaná, nereplikujúca sa mRNA kódujúca monoklonálnu protilátku chráni zvieratá pred infekčným patogénom.Článok PubMed Central PubMed Študovňa Google 
198. Stadler, ČR a kol. Eliminácia veľkých nádorov u myší bišpecifickými protilátkami kódovanými mRNA. Nat. Med. 23 , 815-817 (2017).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
199. Thran, M. a kol. mRNA sprostredkuje pasívnu vakcináciu proti infekčným agens, toxínom a nádorom. EMBO Mol. Med. 9 , 1434-1447 (2017).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
200. Sebastian, M. a kol. Štúdia fázy Ib hodnotiaca samoadjuvovanú vakcínu proti rakovine mRNA (RNActive® ⁾ kombinovanú s lokálnym ožarovaním ako konsolidačnú a udržiavaciu liečbu pre pacientov s nemalobunkovým karcinómom pľúc v štádiu IV. BMC Cancer 14 , 748 (2014).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
201. Wang, Y. a kol. Systémové dodávanie modifikovanej mRNA kódujúcej tymidínkinázu vírusu herpes simplex 1 na cielenú génovú terapiu rakoviny. Mol. Ther. 21 , 358-367 (2013).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
202. Perche, F. a kol. Zlepšenie transfekcie dendritických buniek in vivo a vakcinácie proti melanómu B16F10 manozylovanými histidylovanými lipopolyplexmi naplnenými mediátorovou RNA nádorového antigénu. Nanomedicína 7 , 445-453 (2011).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
203. Mockey, M. a kol. Vakcína proti rakovine založená na mRNA: prevencia progresie a metastáz melanómu B16 systémovou injekciou MART1 mRNA histidylovaných lipopolyplexov. Cancer Gene Ther. 14 , 802-814 (2007).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
204. Uchida, S. a kol. Systémové dodávanie mediátorovej RNA na liečbu rakoviny pankreasu pomocou polyplexných nanomicel s cholesterolovou skupinou. Biomateriály 82 , 221-228 (2016).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
205. Lazzaro, S. a kol. Priming CD8 T-buniek po očkovaní mRNA je obmedzený na bunky prezentujúce antigén pochádzajúce z kostnej drene a môže zahŕňať prenos antigénu z myocytov. Immunology 146 , 312-326 (2015).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
206. Van Driessche, A. a kol. Výroba autológnych zrelých dendritických buniek elektroporovaných mRNA na klinickej úrovni a testovanie bezpečnosti u pacientov s akútnou myeloidnou leukémiou v klinickej štúdii fázy I s eskaláciou dávky. Cytoterapia 11 , 653-668 (2009).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
207. Van Tendeloo, VF a kol. Indukcia kompletných a molekulárnych remisií pri akútnej myeloidnej leukémii očkovaním dendritickými bunkami cielenými na antigén Wilmsovho tumoru 1. Proc. Natl Acad. Sci. USA 107 , 13824 – 13829 (2010).Článok CAS PubMed PubMed Central Študovňa Google 
208. Berneman, ZN a kol. Vakcinácia dendritických buniek pri malígnom pleurálnom mezotelióme: štúdia fázy I/II [abstrakt]. J. Clin. Oncol. 32 (Suppl.), 7583 (2014).Článok Študovňa Google 
209. Amin, A. a kol. Prežitie s AGS-003, autológnou imunoterapiou na báze dendritických buniek, v kombinácii so sunitinibom u nepriaznivo rizikových pacientov s pokročilým renálnym bunkovým karcinómom (RCC): výsledky štúdie fázy 2. J. Immunother. Rakovina 3 , 14 (2015).Článok PubMed Central PubMed Študovňa Google 
210. Khoury, HJ a kol. Imunitné odpovede a dlhodobý stav recidívy ochorenia po imunoterapii dendritických buniek na báze telomerázy u pacientov s akútnou myeloidnou leukémiou. Rakovina 123 , 3061–3072 (2017).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
211. Sebastian, M. a kol. Vakcinácia mediátorovou RNA pri NSCLC: zistenia z klinickej štúdie fázy I/IIa [abstrakt]. J. Clin. Oncol. 29 (Suppl.), 2584 (2011).Článok Študovňa Google 
212. Rausch, S., Schwentner, C., Stenzl, A. & Bedke, J. mRNA vakcína CV9103 a CV9104 na liečbu rakoviny prostaty. Hum. Vaccin Immunother. 10 , 3146-3152 (2014).Článok PubMed Central PubMed Študovňa Google 
213. Mitchell, DA a kol. Blokáda IL-2 receptora a monoklonálnou protilátkou počas lymfopénie selektívne vyčerpáva regulačné T bunky u myší a ľudí. Blood 118 , 3003-3012 (2011).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
214. Borch, TH a kol. Vakcína dendritických buniek transfekovaná mRNA v kombinácii s metronomickým cyklofosfamidom ako liečba pacientov s pokročilým malígnym melanómom. Oncoimmunology 5 , e1207842 (2016).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
215. Kongsted, P. a kol. Očkovanie dendritickými bunkami v kombinácii s docetaxelom pre pacientov s metastatickým karcinómom prostaty rezistentným na kastráciu: randomizovaná štúdia fázy II. Cytoterapia 19 , 500–513 (2017).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
216. Kyte, JA a kol. Imunitná odpoveď a dlhodobý klinický výsledok u pacientov s pokročilým melanómom očkovaných dendritickými bunkami transfekovanými nádorovou mRNA. Oncoimmunology 5 , e1232237 (2016).Článok PubMed Central PubMed CAS Študovňa Google 
217. Vik-Mo, EO a kol. Terapeutická vakcinácia proti autológnym rakovinovým kmeňovým bunkám dendritickými bunkami transfekovanými mRNA u pacientov s glioblastómom. Cancer Immunol. Imunother. 62 , 1499-1509 (2013).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
218. Lesterhuis, WJ a kol. Imunogenicita dendritických buniek pulzovaných CEA peptidom alebo transfekovaných CEA mRNA na očkovanie pacientov s kolorektálnym karcinómom. Anticancer Res. 30 , 5091-5097 (2010).PubMed Študovňa Google 
219. Aarntzen, EH a kol. Vakcinácia dendritickými bunkami elektroporovanými mRNA indukuje silné odpovede CD4 ⁺ a CD8 ⁺ T buniek špecifické pre nádorový antigén u pacientov s melanómom v štádiu III a IV. Clin. Cancer Res. 18 , 5460-5470 (2012).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
220. Bol, KF a kol. Dlhé celkové prežitie po očkovaní dendritickými bunkami u pacientov s metastatickým uveálnym melanómom. Am. J. Ophthalmol. 158 , 939-947 (2014).Článok CAS PubMed Študovňa Google 
221. Bol, KF a kol. Profylaktické vakcíny sú silnými aktivátormi dendritických buniek odvodených od monocytov a riadia účinné protinádorové reakcie u pacientov s melanómom za cenu toxicity. Cancer Immunol. Imunother. 65 , 327-339 (2016).Článok CAS PubMed Central PubMed Študovňa Google 
222. Weide, B. a kol. Výsledky prvej fázy I/II klinickej štúdie očkovania s priamou injekciou mRNA. J. Immunother. 31 , 180-188 (2008).Článok CAS PubMed Študovňa Google 

Poďakovanie

DW podporil National Institute of Allergy and Infectious Disease (NIAID) amerického Národného inštitútu zdravia (NIH) pod číslami ocenení CHAVI-ID UM1-AI100645, R01-AI050484, R01-AI124429 a R01-AI084860, grantom od Gatesa CollaCAV Gates pre vakcíny AIDS OPP1033102, od Agentúry pre obranné pokročilé výskumné projekty v rámci grantu HR0011-17-2-0069 a od divízie New Frontier Sciences spoločnosti Takeda Pharmaceuticals. FWP bol podporený grantom Centra pre HIV/AIDS vakcínovú imunológiu a objavovanie imunogénov (CHAVI-ID) UM1-AI100645, grantom Agentúry pre obranné pokročilé výskumné projekty HR0011-17-2-0069 a grantom Gatesovej nadácie OPP1066832. Autori oceňujú K. Karikó za jej veľmi užitočné rady.

Informácie o autorovi

Autori a príslušnosti

1. Department of Medicine, University of Pennsylvania, Philadelphia, 19104, Pennsylvania, USANorbert Pardi, Michael J. Hogan a Drew Weissman
2. Duke Human Vaccine Institute, Duke University School of Medicine, Durham, 27710, Severná Karolína, USAFrederick W. Porter

Zodpovedajúci autor

Korešpondencia Drewovi Weissmanovi .

Etické vyhlásenia

Konkurenčné záujmy

V súlade so zásadami a postupmi Pensylvánskej univerzity a našimi etickými záväzkami ako výskumníkov uvádzame, že Norbert Pardi, Michael J. Hogan a Drew Weissman sú menovaní na patentoch, ktoré popisujú použitie nukleozidmi modifikovanej mRNA ako platformy na dodávanie terapeutických proteínov a vakcín. O týchto záujmoch sme v plnej miere informovali University of Pennsylvania a máme schválený plán na riadenie akýchkoľvek potenciálnych konfliktov vyplývajúcich z udeľovania licencií na naše patenty. Frederick Porter neuvádza žiadne konkurenčné finančné záujmy.

PowerPointové snímky

PowerPointová snímka pre Obr. 1

PowerPointová snímka pre obr. 2

PowerPointová snímka pre obr. 3

PowerPointová snímka pre tabuľku 1

PowerPointová snímka pre tabuľku 2

PowerPointová snímka pre tabuľku 3

PowerPointová snímka pre tabuľku 4

Slovník pojmov

Dendritická bunka

(DC). Profesionálna bunka prezentujúca antigén, ktorá môže silne aktivovať CD4 ⁺ a CD8 ⁺ T bunky prezentáciou peptidových antigénov na molekulách hlavného histokompatibilného komplexu (MHC) triedy I a II spolu s kostimulačnými molekulami.Molekulárny vzor spojený s patogénom

(PAMP). Zachovaná molekulárna štruktúra produkovaná mikroorganizmami a rozpoznaná ako signál nebezpečenstva zápalu rôznymi vrodenými imunitnými receptormi.Interferón typu I

Rodina proteínov, vrátane, bez toho aby bol výpočet obmedzujúci, interferónu-p (IFNp) a viacerých izoforiem IFNa, uvoľňovaných bunkami v reakcii na vírusové infekcie a patogénne produkty. Snímanie IFN typu I má za následok upreguláciu interferónom stimulovaných génov a antivírusový bunkový stav.Rýchla proteínová kvapalinová chromatografia

(FPLC). Forma kvapalinovej chromatografie, ktorá sa môže použiť na čistenie proteínov alebo nukleových kyselín. Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) je podobný prístup, ktorý využíva vysoký tlak na čistenie materiálov.Nukleozidová modifikácia

Začlenenie chemicky modifikovaných nukleozidov, ako je pseudouridín, 1-metylpseudouridín, 5-metylcytidín a iné, do transkriptov mRNA, zvyčajne na potlačenie vrodeného imunitného snímania a/alebo na zlepšenie translácie.Adjuvans

Prísada do vakcín, ktorá moduluje a/alebo zvyšuje potenciu imunitnej odpovede, čo často umožňuje efektívne použitie nižších dávok antigénu. Adjuvans môžu byť založené na molekulových vzoroch spojených s patogénom (PAMP) alebo na iných molekulách, ktoré aktivujú vrodené imunitné senzory.MHC trieda I

Polymorfný súbor proteínov exprimovaných na povrchu všetkých jadrových buniek, ktoré prezentujú antigén CD8 ⁺ (vrátane cytotoxických) T lymfocytov vo forme proteolyticky spracovaných peptidov, typicky s dĺžkou 8–11 aminokyselín.MHC triedy II

Polymorfný súbor proteínov exprimovaných na profesionálnych bunkách prezentujúcich antigén a určitých iných typoch buniek, ktoré prezentujú antigén CD4 ⁺ (pomocným) T bunkám vo forme proteolyticky spracovaných peptidov, typicky s dĺžkou 11–30 aminokyselín.Dobrá výrobná prax

(GMP). Súbor pokynov a postupov navrhnutých tak, aby zaručili výrobu trvalo vysokokvalitných a bezpečných farmaceutických produktov. Na klinické skúšky na ľuďoch sa musia používať materiály triedy GMP.Pasívna imunizácia alebo pasívna imunoterapia

Na rozdiel od tradičných (aktívnych) vakcín tieto terapie nevytvárajú imunitné reakcie de novo , ale môžu poskytnúť imunitne sprostredkovanú ochranu prostredníctvom dodania protilátok alebo génov kódujúcich protilátky. Pasívne očkovanie ponúka výhodu okamžitého zásahu, ale nevýhodu vysokej ceny.

• Zverejnené12. januára 2018
• Dátum vydaniaapríla 2018

Zdroj https://www.nature.com

Zákony

Európska únia reviduje farmaceutickú legislatívu s cieľom rozšíriť mRNA „vakcíny“!!

Klinické štúdie génovej terapie na celom svete v rokoch ……

Centrum výnimočnosti NATO pre strategickú komunikáciu – „Teória vakcín a dezinformácie“

Vykonávanie klinických skúšok a dodávanie liekov na humánne použitie, ktoré obsahujú alebo pozostávajú z geneticky modifikovaných organizmov

Digitálny očkovací preukaz, zdravotný personál v školách ohľadom očkovania naplánované ešte v roku 2017

Tiež pozri tu:

https://ajptonline.com/HTML_Papers/Asian%20Journal%20of%20Pharmacy%20and%20Technology__PID__2022-12-3-11.html

Ďalšie Referencie (247)

mRNA sprostredkuje pasívnu vakcináciu proti infekčným agens, toxínom a nádorom

Článok

K dispozícii plné znenie

• august 2017

• Moritz Thran
• Jean Mukherjee
• Marion Pönisch
• Thomas Schlake

ZobraziťZobraziť abstrakt

Imunogénna osobná neoantigénová vakcína pre pacientov s melanómom

Článok

K dispozícii plné znenie

• júl 2017

• Patrick A Ott
• Zhuting Hu
• Derin B. Keskin
• Catherine J. Wu

ZobraziťZobraziť abstrakt

Kde vakcíny?

Článok

K dispozícii plné znenie

• júna 2017
• J INFEKCIA

• Charlene MC Rodrigues
• Marta Valente Pinto
• Manish Sadarangani
• Stanley A. Plotkin

ZobraziťZobraziť abstrakt

Pokroky v DNA vakcínových vektoroch, nemechanických metódach dodávania a molekulárnych adjuvans na zvýšenie imunogenicity

Článok

K dispozícii plné znenie

• júna 2017

• John J. Suschak
• James A Williams
• Connie S. Schmaljohn

ZobraziťZobraziť abstrakt

Súčasný stav a klinické vyhliadky prenosu génov pre protilátky

Článok

K dispozícii plné znenie

• júna 2017
• J TRANSL MED

• Kevin Hollevoet
• Paul Declerck

ZobraziťZobraziť abstrakt

Predklinický a klinický dôkaz imunogenicity mRNA vakcín proti vírusom chrípky H10N8 a H7N9

Článok

K dispozícii plné znenie

• júna 2017

• Kapil Bahl
• Joe J. Senn
• Oľga Južakovová
• Giuseppe Ciaramella

ZobraziťZobraziť abstrakt

RNA senzory vrodeného imunitného systému a ich detekcia patogénov

Článok

K dispozícii plné znenie

• apríla 2017
• IUBMB LIFE

• Nanhua Chen
• Pengpeng Xia
• Shuangjie Li
• Jianzhong Zhu

ZobraziťZobraziť abstrakt

Vakcína s nanočasticami RNA proti vírusu Zika vyvoláva reakcie protilátok a CD8+ T buniek v myšom modeli

Článok

K dispozícii plné znenie

• december 2017

• Jasdave Chahal
• Tao Fang
• Andrew Woodham
• Hidde L Ploegh

ZobraziťZobraziť abstrakt

Podávanie nukleozidmi modifikovanej mRNA kódujúcej široko neutralizujúcu protilátku chráni humanizované myši pred infekciou HIV-1

Článok

K dispozícii plné znenie

• Mar 2017

• Anthony J. Secreto
• Xiaochuan Shan
• Norbert Pardi
• Drew Weissman

ZobraziťZobraziť abstrakt

Terapeutické protilátky na infekčné choroby

Článok

K dispozícii plné znenie

• Mar 2017
• B SVETOVÝ ZDRAVOTNÝ ORGÁN

• Erin Sparrowová
• Martin Friede
• Mohamud Sheikh
• Siranda Torvaldsen

Zobraziť

Tfh bunky a HIV bnAbs, model imunodominancie problému tvorby protilátok neutralizujúcich HIV

Článok

K dispozícii plné znenie

• Január 2017

• Colin Havenar-Daughton
• Jeong Hyun Lee
• Shane Crotty

ZobraziťZobraziť abstrakt

Adjuvantné účinky sekvenčne skonštruovanej mRNA vakcíny: translačné profilovanie demonštruje podobnú ľudskú a myšaciu vrodenú odpoveď

Článok

K dispozícii plné znenie

• Január 2017
• J TRANSL MED

• Darin Edwards
• Edith Jasný
• Heesik Yoon
• Vaughan Wittman

ZobraziťZobraziť abstrakt

Imunogenicita a ochranná účinnosť indukovaná samoamplifikačnými mRNA vakcínami kódujúcimi bakteriálne antigény

Článok

K dispozícii plné znenie

• decembra 2016
• VACCINE

• Giulietta Maruggi
• Emiliano Chiarot
• Domenico Maione
• Cinzia Giovani

ZobraziťZobraziť abstrakt

Sľub a problémy spojené s použitím rekombinantného AAV na dodávanie anti-HIV protilátok

Článok

K dispozícii plné znenie

• november 2016

• Sebastian P. Fuchs
• Ronald Desrosiers

ZobraziťZobraziť abstrakt

Samoamplifikačné mRNA vakcíny exprimujúce viaceré konzervované chrípkové antigény poskytujú ochranu pred homológnou a heterosubtypickou vírusovou výzvou

Článok

K dispozícii plné znenie

• august 2016
• PLOS ONE

• Diletta Magini
• Cinzia Giovani
• Simona Mangiavacchi
• Sylvie Bertholet

ZobraziťZobraziť abstrakt

Príjem syntetickej nahej RNA dendritickými bunkami rezidentnými na koži prostredníctvom makropinocytózy umožňuje expresiu antigénu a indukciu reakcií T-buniek u myší

Článok

K dispozícii plné znenie

• júl 2016
• CANCER IMMUNOL IMMUN

• Abderraouf Selmi
• Fulvia Vascottová
• K. Kautz-Neu
• Sebastian Kreiter

ZobraziťZobraziť abstrakt

Vakcína dendritických buniek transfekovaná mRNA v kombinácii s metronomickým cyklofosfamidom ako liečba pre pacientov s pokročilým malígnym melanómom

Článok

K dispozícii plné znenie

• júl 2016

• Troels Holz Borch
• Lotte Engell-Noerregaard
• Trine Zeeberg Iversen
• Inge Marie Svane

ZobraziťZobraziť abstrakt

Stabilita endogénnej a pridanej RNA v krvných vzorkách, sére a plazme

Článok

• október 2002

• Nancy BY Tsui
• Enders KO Ng
• Dennis Lo

ZobraziťZobraziť abstrakt

Expresia receptora BLR1 spojeného s G-proteínom definuje zrelé, recirkulujúce B bunky a podskupinu T-pomocných pamäťových buniek

Článok

• august 1994

• R. Forster
• Tabitha Emrichová
• Elisabeth Kremmerová
• Martin Lipp

ZobraziťZobraziť abstrakt

Polčasy beta a gama globínových mediátorových RNA a kapacity na syntézu proteínov v kultivovaných ľudských retikulocytoch

Článok

• november 1985

• J Ross
• TD Sullivan

ZobraziťZobraziť abstrakt

Očkovanie dendritickými bunkami pri malígnom mezotelióme pleury: Štúdia fázy I/II.

Článok

• máj 2014

• Zwi N Berneman
• Paul Germonpré
• Manon Thirza Huizing
• Sébastien Anguille

Zobraziť

Bezpečnosť a imunogenicita mRNA vakcíny proti besnote u zdravých dospelých: Otvorená, nerandomizovaná, prospektívna, prvá klinická štúdia fázy 1 u ľudí

Článok

• júl 2017
• LANCET

• Martin Alberer
• Ulrike S Gnad-Vogt
• Henoch S. Hong
• Frank von Sonnenburg

ZobraziťZobraziť abstrakt

Vakcínou sprostredkovaná ochrana proti vrodenému ochoreniu vyvolanému vírusom Zika

Článok

• júl 2017

• Brett Jagger
• Chao Shan
• Justin Richner
• Michael S. Diamond

ZobraziťZobraziť abstrakt

Personalizované RNA mutanómové vakcíny mobilizujú polyšpecifickú terapeutickú imunitu proti rakovine

Článok

• júl 2017

• Evelyna Derhovanessian
• Matthias Miller
• Özlem Türeci
• Ugur Sahin

ZobraziťZobraziť abstrakt

Imunogenicita terapie dendritickými bunkami AGS-004 u pacientov liečených počas akútnej infekcie HIV

Článok

• júna 2017

• Cynthia L Gay
• Mark DeBenedette
• Irina Y Tcherepanová
• Dávid Margolis

ZobraziťZobraziť abstrakt

Eliminácia veľkých nádorov u myší bišpecifickými protilátkami kódovanými mRNA

Článok

• júna 2017
• NAT MED

• Christiane Stadlerová
• Hayat Bähr-Mahmud
• Leyla Celik
• Ugur Sahin

ZobraziťZobraziť abstrakt

Dlhodobé prežitie pri glioblastóme s cytomegalovírusom pp65-cielené očkovanie

Článok

• apríla 2017

• Kristen Batich
• Elizabeth Reap
• Gary E Archer
• John H. Sampson

ZobraziťZobraziť abstrakt

Vyvolanie antivírusovej odpovede sprostredkovanej IFN samoamplifikujúcou RNA vakcínou: Dôsledky pre návrh vakcíny

Článok

• apríla 2017

• Timothy Pepini
• Anne-Marie Pulichino
• Thomas Carsillo
• Carlo Iavarone

ZobraziťZobraziť abstrakt

Imunitné odpovede a dlhodobý stav recidívy ochorenia po imunoterapii dendritických buniek na báze telomerázy u pacientov s akútnou myeloidnou leukémiou

Článok

• apríla 2017
• CANCER-AM CANCER SOC

• H. Jean Khoury
• Robert H. Collins
• William Blum
• John F. DiPersio

ZobraziťZobraziť abstrakt

mRNA vakcíny proti rakovine – správy, ktoré prevládajú

kapitola

• Mar 2017
• CURR TOP MICROBIOL

• Christian Grunwitz
• Marie-Lena Kranzová

ZobraziťZobraziť abstrakt

Modifikované mRNA vakcíny chránia pred infekciou vírusom Zika

Článok

• Mar 2017

• Justin Richner
• Slnečné Himansu
• Kimberly A Dowd
• Michael S. Diamond

Zobraziť

Vakcína proti humbuku

Článok

• Február 2017

• Laura DeFrancesco

ZobraziťZobraziť abstrakt

Biofarmaceutiká: Referenčné produkty a biologicky podobné lieky na liečbu zápalových ochorení

Článok

• Február 2017
• THER DROG MONIT

• Ann Gils
• Antonio Bertolotto
• Denis Mulleman
• Paul Declerck

ZobraziťZobraziť abstrakt

Modifikované mRNA vakcíny chránia pred infekciou vírusom Zika

Článok

• Február 2017

• Justin Richner
• Slnečné Himansu
• Kimberly A Dowd
• Michael S. Diamond

ZobraziťZobraziť abstrakt

Očkovanie dendritickými bunkami v kombinácii s docetaxelom u pacientov s metastatickým karcinómom prostaty rezistentným na kastráciu: randomizovaná štúdia fázy II

Článok

• Február 2017
• CYTOTERAPIA

• Per Kongsted
• Eva Ellebaek
• Troels Holz Borch
• Inge Marie Svane

ZobraziťZobraziť abstrakt

V správe

Článok

• Február 2017

• Kelly Servicková

ZobraziťZobraziť abstrakt

Ochrana proti vírusu Zika jedinou vakcináciou mRNA s nízkou dávkou nukleozidov

Článok

• Február 2017

• Norbert Pardi
• Michael Hogan
• Rebecca Pelcová
• Drew Weissman

ZobraziťZobraziť abstrakt

mRNA vakcíny proti rakovine

kapitola

• september 2016
• Posledné výsledky Canc Res

• Katja Fiedler
• Sandra Lazzarová
• Johannes Lutz
• Regina Heidenreich

ZobraziťZobraziť abstrakt

Nanotechnológie v dodávaní mRNA terapeutík pomocou nevírusových vektorových dodávacích systémov

Článok

• Január 2017
• GÉN TAM

• Shan Guan
• J Rosenecker

ZobraziťZobraziť abstrakt

Nové adjuvans na báze RNA zlepšuje odozvy vakcíny špecifické pre vírus lokálnym spúšťaním účinkov závislých od TLR a RLH

Článok

• Január 2017
• J IMMUNOL

• Annett Ziegler
• Claudia Soldnerová
• Štefan Lienenklaus
• Ulrich Kalinke

ZobraziťZobraziť abstrakt

Európske regulačné prostredie vakcín na báze RNA

kapitola

• december 2017

• T. Hinz
• Kajo Kallen
• Cedrik Michael Britten
• Ulrich Kalinke

ZobraziťZobraziť abstrakt

Technológia RNActive®: Generovanie a testovanie stabilných a imunogénnych mRNA vakcín

kapitola

• december 2017

• Susanne Rauchová
• Johannes Lutz
• Aleksandra Kowalczyková
• Regina Heidenreich

ZobraziťZobraziť abstrakt

Dodávanie mRNA asistované lipidovými nanočasticami pre silnú imunoterapiu rakoviny

Článok

• november 2016

• Matthias Oberli
• Andreas Reichmuth
• Robert Dorkin
• Daniel Blankschtein

ZobraziťZobraziť abstrakt

Horizontálny prenos RNA a proteínov medzi bunkami extracelulárnymi mikrovezikulami: o 14 rokov neskôr

Článok

• januára 2016

• Michaela Ratajczaková
• Janina Ratajczak

Zobraziť

Trvalá dostupnosť antigénu počas iniciácie zárodočného centra zvyšuje protilátkovú odpoveď na očkovanie

Článok

• október 2016

• Hok Hei Tam
• Mariane B. Melo
• Myungsun Kang
• Darrell J Irvine

ZobraziťZobraziť abstrakt

mRNA: Všestranná molekula pre vakcíny proti rakovine

Článok

• november 2016
• AKTUÁLNE OTÁZKY MOL BIOL

• Mustafa Diken
• Marie-Lena Kranzová
• Ugur Sahin
• Sebastian Kreiter

ZobraziťZobraziť abstrakt

Imunitná odpoveď a dlhodobý klinický výsledok u pacientov s pokročilým melanómom očkovaných dendritickými bunkami transfekovanými nádorovou mRNA

Článok

• október 2016

• Jon Amund Kyte
• Steinar Aamdal
• Svein Dueland
• Gkv Kvalheim

ZobraziťZobraziť abstrakt

Štrukturálna analýza odhaľuje, že Toll-like receptor 7 je duálny receptor pre guanozín a jednovláknovú RNA

Článok

• október 2016
• IMUNITA

• Zhikuan Zhang
• Umeharu Ohto
• Takuma Shibata
• Toshiyuki Shimizu

ZobraziťZobraziť abstrakt

Účinnosť a imunogenicita nemodifikovanej a pseudoridínom modifikovanej mRNA podávanej systémovo s lipidovými nanočasticami in vivo

Článok

• september 2016

• Kevin J. Kauffman
• Faryal Mir
• Siddharth Jhunjhunwala
• Daniel G. Anderson

ZobraziťZobraziť abstrakt

Očkovanie v detstve

Článok

• august 2016

• David Steven Younger
• Adam PJ mladší
• Sally Guttmacher

Zobraziť

Nanočastice dendrimer-RNA vytvárajú ochrannú imunitu proti smrteľnej ebole, chrípke H1N1 a Toxoplasma gondii s jednou dávkou

Článok

K dispozícii plné znenie

• júl 2016

• Jasdave Chahal
• Omar F Khan
• Christopher L. Cooper
• Daniel G. Anderson

ZobraziťZobraziť abstrakt

mRNA vakcína kódujúca glykoproteín vírusu besnoty indukuje ochranu pred letálnou infekciou u myší a koreluje s ochranou u dospelých a novonarodených ošípaných

Článok

K dispozícii plné znenie

• júna 2016
• PLOS NEGLECT TROP D

• Margit Schneeová
• Annette B Vogel
• Daniel Voss
• Lothar Stitz

ViewShow abstract

From the RNA world to the clinic

Article

• Jun 2016

• Bruce A. Sullenger
• Smita K. Nair

ViewShow abstract

Self-adjuvanted mRNA vaccines induce local innate immune responses that lead to a potent and boostable adaptive immunity

Article

• Jun 2016

• Aleksandra Kowalczyk
• Fatma Doener
• Kai Zanzinger
• Regina Heidenreich

ViewShow abstract

Systemic RNA delivery to dendritic cells exploits antiviral defence for cancer immunotherapy

Article

• Jun 2016

• Marie-Lena Kranz
• Mustafa Diken
• Heinrich Haas
• Ugur Sahin

View Show abstract

Už len stačilo niečo vymyslieť, aby mohli spustiť tieto nové vakcíny